• Forum - Quantité, ARNm, Standard

mesure de l'expression d'un gene

pour la quantité d'ARNm, Northern -blot ou slot-blot, Real time PCR (Si l'on dispose de peu de matériel car c'est onéreux par rapport au northern.).Dans tous les cas il faut faire des statistiques et il y a toujours le problême de standard interne (qui permet de pondérer les valeurs).  [...] La RT-PCR ne t'indiquera que le fait que ton ARNm est présent, rien d'autre, car la RT-PCR standard n'est absolument pas quantitative.  [...]

Gène de ménage (gène de référence...)

dans 3 échantillons (une référence, une condition 1 et une condition 2) on avait une quantité totale d'ARN égale mais une quantité d'ARNm à quantifier et d'ARN du gène standard en quantité différente. Ok, mais, comment on a introduit l'ARN standard dans l'expérience.  [...] En rapportant une valeur à l'autre tu auras l'expression relative de ta quantité de TGFB. Je pense que ton prof à entendu par gène standard le gène à étudier.  [...]

RT-PCR et PAGE en conditions dénaturantes???

l'avantage d'une PCR en temps réelle par rapport à une RT-PCR classique est qu'elle va permettre de dire si il y a 2 fois plus. 2,4 fois plus. 13, 8 fois plus d'ARNm dans une conditions par rapport à une autre. quantification relative impossible à faire en RT-PCR (qui te permet de dire.  [...] si pendant ta PCR en temps réelle, tu insère un standard au sein de la manip, tu vas pouvoir être capable de dire le nombre de copies de ton ARNm présent dans le tube. tu arrives à de la quantification abslue, et là, on rentre dans le domaine de la Q-PCR.  [...]

Vapeur d'eau dans les poumons = danger ?

Physiquement la quantité de vapeur dans l'air ne peut pas dépasser la quantité correspondant à la saturation, ce qui dépend de la température et la pression. Dans le cas indiqué, les conditions sont très proches des standard.  [...] Or il est très courant de respirer la quantité max en conditions standards. c'est ce qu'il se passe quand l'hygrométrie est de 100%, par définition, une condition pas vraiment rare en climat tropical ou dans une serre.  [...]

determination de l'activité xanthine oxydase dans le foie

le foie récupéré est broyé ensuite mis dans un tampon de lyse et l'activité xanthine oxydase est mesurée dans un mélange réactionnel contenant la xanthine, le tampon et HCl qui est rajouté aprés 10mn pour stopper la téaction. L'absorbance d'acide urique qui est le produit de la xanthine oxydase est suivie à 292nm.   [...] en parallele je calcul la quantité de protéine présente dans l'échantillon par le bradford (BSA comme standard).  [...]

[Divers] Agroalim : solubilité lait en poudre

J'ai la fiche technique d'un lait en poudre dont la solubilité est exprimée en ml (solubilité = 1 ml max) et je ne sais pas à quoi cela correspond. c'est 1 ml de quoi dans quoi.   [...] La quantite de lait a mettre est celle prevue par le mode d'emploi et qui vise a reconstituer du lait standard.  [...]

[Biochimie] Extrémité 5' ARNm

L'hydrolyse du pyrophosphate en orthophosphate est importante pour favoriser les réactions biosynthétiques telles que la synthèse de l'ADN*.Cette réaction hydrolytique est catalysée chez E.coli par une pyrophosphatase qui a une masse de 120 kdal et est constituée de 6 sous unités identiques.   [...] L'enzyme purifiée a une Vm de 2800 unités par milligramme d'enzyme. Pour cette*enzyme, une unité d'activité est définie comme la quantité d'enzyme qui hydrolyse 10 µmol de pyrophosphate en 15 min à 37°C dans les conditions standard de dosage.  [...]

[Biochimie] Dosage de protéine / méthode de lowry

Je mesure à 680, mais de toute facon je pense pas que ca fasse de grande différences. On est en plein dans le rouge à cette longueur d'onde, donc pour du bleu c'est pas mal, et puis de toute façon vaux mieux faire ce qu'on dit dans ces cas là. Les mecs qui ont mis au point cette technique on fait énormément de tests pour trouver la meilleur (qui n'est pas forcément celle ou cela absorbe le plus).   [...] La BSA est généralement la protéine standard qui possède tous les aa en quantité relativement représentative des autres protéines.  [...]

pcr quantitative et standard interne

J'ai compris le principe de la pcr (amplifier un fragment d'ADN ou d'ARN). Mais qu'est ce que la PCR quantitative c'est la taille du fragment amplifié que l'on veut connaitre, c'est ca et quel rapport avec la notion de standard interne (j'ai noté dans mon cours que le standard interne est un gène présent dans ttes les cellules et qu'il a pour but de corriger les erreurs O_O).  [...] Une PCR quantitative permet d'amplifier l'ADN et d'en déterminer la quantité. En utilisant un fluorochrome pour l'ADN amplifié, par exemple, on quantifie ainsi le nombre de réplicons. Le problème avec ce genre de technique c'est qu'il faut une base, un standard pour savoir ce que représente la quantité.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment analyser les résultats de PCR quantitative???

Moi j'utilise la quantification relative, mais je regarde l'expression de gènes sous plusieurs conditions pharmacologiques. J'ai donc un témoin, qu'on appelle le basal, qui nous donne une quantité arbitraire d'ARNm en Ct, il représente l'expression basale.  [...] L'intérêt du standard est de pouvoir calculer l'efficacité de la PCR.[ Rappel Q(i+1) = Q(i) x E, avec Q(i) la quantité d'ADN au cycle i, et E l'efficacité d'amplification. On considère souvent, à tort, que E=2, or si l'on compare 2 gènes ayant des efficacité d'amplifications différentes et que l'on prend E=2 pour chaque gène, on induit une erreure, d'autant plus grande que le delta Ct est grand et que la différence entre les efficacités est grande.  [...]