• Forum - Puits, Solution, Marqueur

[Biologie Moléculaire] Electrophorese gel d'agarose

C'est pourquoi dans un des puits on verse une solution de marqueur de taille. C'est un cocktail de plusieurs ADN dont on connait la taille.  [...] Après migration tu observe une ou plusieurs bandes, tu compare la distance puits/bande à celle de ton ADN à celui du marqueur et tu peu déterminer sa taille.  [...]

[Biochimie] Mise en évidence de l'albumine sérique par la méthode BCP-dye binding

Mon objectif est de faire ce test dans des plaques 96 puits, j'ai lu qu'un rapport de 1.200 entre échantillon et solution de marquage était utilisé pour des volumes de 2/3ml, pensez-vous que c'est extrapolable à des volumes de 200/300µl.  [...] Pour commencer, si comme moi dans votre enfance vous avez été privés de la panoplie du petit chimiste avec laquelle on peut faire plein de trucs rigolo avec des solutions qui changent de couleur, vous allez être servis Du violet, du jaune, du bleu... c'est noël dans vos bechers.  [...]

[Biologie Moléculaire] Déterminer la masse d'ADN dans une bande après électrophorèse

D'après le peu que j'ai compris à partir de ses explications, il faut utiliser l'intensité de fluorescence de la bande dans les puits 1 et 3, et la comparer à l'intensité des bandes du puits 2 (marqueur PM).  [...] Ensuite il y a une extrapolation à faire pour déterminer combien il y a d'ADN dans la bande de marqueur à partir de la quantité de marqueur déposée dans le puits.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mutagénèse dirigée

Dans ce kit le contrôle positif de la mutagénèse utilise un plasmide Whitescript de 4,5 kb. Après la mutagénèse et la digestion des produits par l'enzyme Dpn1, je fait un gel de 0,8% agarose pour vérifier avant la transformation si ma mutagénèse à marché.   [...] Oui je dépose un marqueur de taille qui migre normalement et comme tampon de charge j'utilise du bleu de bromophenol (avec glycerol et EDTA).  [...]

[Biologie Moléculaire] Que devient l'ARNr dans une reaction de RT

2/ une puce (c une toute petit plaque avec 16 mini puits) dans chaque puits tu dépose un gel qui contient un Dye spécifique de ton ARN (contrairement au BET) tu ajoutes ensuite un tampon et un ladder de poids moléculaire. L'appareil analyse tes échantillons 1/1 en commençant par le marqueur qui sert de PM et d'étalon.  [...] Il faut remplir une puce avec ton gel+dye avec un système de pression (c une seringue que tu fixe et qui va repartir le gel dans la puce de maniere homogène c'est l'étape délicate et elle dure 30 s exactement.), tu place ton marqueur dans les puits, tu places tes échantillons et tu mets ton ladder, tu vortex et hop dans la machine.  [...]

[Biochimie] Nickel et congélation ...

Heureusement que j'avais tout noter...ou presque...et oui mon problème se situe là... Je vais pas vous faire attendre plus longtemps j'aurai besoin d'un protocole de surproduction de protéine et de purification, ma prot fait dans les 15Kda et je l'avais fait par colonne de nickel.   [...] Est ce que tu as déjà regardé si le tampon utilisé congèle à moins 20°C. Je dis ça car une solution glace+NaCl permet de baisser le point de fusion de l'eau alors avec 8M urée... il est possible que le tampon ne congèle pas.  [...]

[Biotechnologie] méthode de Bradford

J'ai une toute petite question sur le principe de cette méthode. Lorsqu'on veut par exemple quantifier les protéines d'une solution à l'aide d'une gamme de sérumalbumine bovine prédéfinie. Où met on le Bradford est ce qu'il est sur toute la plaque de micotitration ou bien il doit être mélanger dans chaque puits avec le sérum albumine et notre solution à titrer.  [...] Le bradford est un réactif, il doit être ajouté dans chaque puits contenant une protéine à doser, que ce soit l'étalon (la BSA) ou la solution à concentration inconnue.  [...]

[Immunologie] ELISA coating et conservation

Je viens de lire. lavage par trempage. Ce qui voudrai dire que tu immerge ta plaque dans ta solution de tween Si c'est le cas, c'est pas super top comme méthode. Si tu n'as pas d'automate de lavage, tu peux toujours remplir tes puits avec ta solution, les vider en essayant de ne pas transférer de solution d'un puit à l'autre, puis de taper ta plaque contre du papier absorbant pour sécher les puits aux maximum.  [...] Ce que je fais, c'est de congeler la plaque une fois l'étape de coating entièrement réalisée (la plaque lavée et séchée). Je la congèle donc sans solution dans les puits.  [...]

[Biochimie] Caractéristiques des tampons utilisés en ELISA

Les solutions d'anticorps sont généralement préparées/diluées dans un tampon véronal (pH=7,4). Autant, je comprends la valeur du pH utilisé (valeur physiologique du pH sanguin, où les anticorps sont sensés être fonctionnels), mais je voudrais connaitre l'utilité du véronal.  [...] Après l'étape de saturation du puits, on ajoute l'anticorps secondaire portant un marqueur de révélation. On ajoute également du Tween 20 et de la BSA dans le tampon véronal où celui ci est dilué.  [...]

Besoin d'aide urgent !

J'avais 2300 cellules/uL, mon prof me demande pour une plaque de 32 puits combien de cette solution de cellule je dois mettre sachant que dans 1 puis je dois mettre 1x10^5 Celllules pour 100uL.  [...] Ton prof te demande simplement combien as-tu besoin de ta solution cellulaire pour remplir une plaque de 32 puits à 1x10e5 cellules / 100µL soit 3.2x10e6 cellules en tout. Il suffit de diviser ce nombre par ta concentration cellulaire et tu auras le volume dont tu as besoin.  [...]