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[Biotechnologie] méthode de Bradford

J'ai une toute petite question sur le principe de cette méthode. Lorsqu'on veut par exemple quantifier les protéines d'une solution à l'aide d'une gamme de sérumalbumine bovine prédéfinie. Où met on le Bradford est ce qu'il est sur toute la plaque de micotitration ou bien il doit être mélanger dans chaque puits avec le sérum albumine et notre solution à titrer.  [...] Le bradford est un réactif, il doit être ajouté dans chaque puits contenant une protéine à doser, que ce soit l'étalon (la BSA) ou la solution à concentration inconnue.  [...]

[Immunologie] Elisa: Help pour blocage du non spé dosage d'anticorps

Ensuite on fait 3 lavages, puis on incube le sérum de patient dilué au 1/100 en PBS/BSA 0.05%/tween 0.05% 1h à 37°C, suivi de 3 lavages. La dernière étape est l'incubation avec un anti-human IgG-PAL, puis révélation au pNPP.  [...] Le problème rencontré est un bruit de fond encore trop élevé lorsque le sérum est incubé dans les puits revêtus de streptavidine mais non coatés avec le peptide (DO entre 0.35 et 0.45 selon les échnatillons). Pourtant ces puits sont prébloqués au superblock par Pierce lors de la fabrication des plaques.  [...]

[Immunologie] teste de grossesse immunologique

Le principe du test de grossesse immunologique, c'est la coloration d'une petite bande de textile faisant apparaitre un + pour positif ou alors un - pour negatif, par la reconnaissance des recepteurs alpha des antigènes aux anticorps, qui se colorent pour former la bande verticale du +.   [...] Ce principe immunologique, qui untilise l'hormone HCG (produite par l'embryon des son plus jeune age, ici considerée comme l'antigène), est assez courant.   [...]

[Immunologie] Résultats Ouchterlony

Afin de déterminer la composition d'un antisérum on le teste contre différents sérum albumine.  [...] Le résultat montre la présence d'un arc continu entre le puit d'antisérum et les deux puits en face de sérum albumine de boeuf et de sérum albumine humaine on peut donc dire que l'antisérum possède des anticorps contre les albumines de ces sérums mais je ne vois pas pourquoi on a un arc continu.  [...]

[Microbiologie] dilution

J'ai un peu de mal sur cette dilution. je dois compléter la ligne des facteurs de dilution et du titre en sérum étalon.  [...] A partir du sérum étalon à 100.10^-3UI/mL, faire la gamme de dilutions suivante, avec un volume final par puits de 100 microlitres.  [...]

[Immunologie] ELISA coating et conservation

Je viens de lire. lavage par trempage. Ce qui voudrai dire que tu immerge ta plaque dans ta solution de tween Si c'est le cas, c'est pas super top comme méthode. Si tu n'as pas d'automate de lavage, tu peux toujours remplir tes puits avec ta solution, les vider en essayant de ne pas transférer de solution d'un puit à l'autre, puis de taper ta plaque contre du papier absorbant pour sécher les puits aux maximum.  [...] Ce que je fais, c'est qu'après incubation je vide les plaques fortement, je les claque contre le bord de l'évier, je les remplis de solution de Tween 20, je les laisse 5 minutes avec la solution dans les puits (c'est ce que j'appelle trempage ), et je les vide et claque contre du papier absorbant comme tu l'as dit. Je répète ça 3 fois.  [...]

Besoin d'aide urgent !

J'avais 2300 cellules/uL, mon prof me demande pour une plaque de 32 puits combien de cette solution de cellule je dois mettre sachant que dans 1 puis je dois mettre 1x10^5 Celllules pour 100uL.  [...] Ton prof te demande simplement combien as-tu besoin de ta solution cellulaire pour remplir une plaque de 32 puits à 1x10e5 cellules / 100µL soit 3.2x10e6 cellules en tout. Il suffit de diviser ce nombre par ta concentration cellulaire et tu auras le volume dont tu as besoin.  [...]

[Immunologie] Problème ELISA direct avec les puits non coatés

Ce message est un peu vieux mais comme j'ai le même problème et que je travaille avec des peptides de taille identiques (pas plus de trente AA), j'aimerias en savoir plsu sur la solution mise en oeuvre. Pour l'instant j'utilise des plaques streptavidine prébloquées au superblock mais le bloquage ne semble pas suffisant.  [...] Quelle concentration de lait et tampon as tu finalement sélectionné pour bloquer tes puits Combien de temps et à quelle température fais tu la saturation As tu ajouté du lait aussi dans ton tampon de dilution des sérums.  [...]

Biochimie: Probleme de dilution / Bouillon Mueller Hilton

A partir d'une solution d'antibiotique fournie et d'une culture d'E.Coli en milieu gélosé.  [...] Dilution de la solution antibiotique, de raison 1/2, en bouillon Mueller Hilton sous un volume final de 50 µL dans les puits de la barette stérile.  [...]

dosage immunologique

Dans le premier cas, tu coates tes puits avec un anticorps dirigés contre la substance à détecter, par exemple anti IL2. Ensuite tu incubes ton échantillon (sérum, surnageant de culture,...) et tu révèles avec un deuxième anticorps couplés à une enzyme. Cette enzyme ve dégrader son substrat qui a été choisi pour changer de couleur lorsqu'il est hydrolysé.  [...] Je permets donc juste une dernière question, plus pratique. Il y a donc au moins deux étapes avant la révelation (1/ incubation de l'échantillon biologique à tester et 2/ dépôt du 2ème anticorps couplé à l'enzyme). mais en pratique lorsqu'une femme fait un test de grossesse par exemple, elle ne dépose que de l'urine sur le test et pas d'anticorps secondaire couplés avec une enzyme, donc comment se fait la détection pour ce genre de test fait à la maison.   [...]