• Forum - Puits, Migration, ADN

[Biologie Moléculaire] électrophorèse en champ pulsé

un gel ou le ladder apparait, une fluorescence qui apparait au niveau des puits pu j'ai débosé mes plugs par contre je ne vois pas de migration de mon ADN.  [...] Au niveau des puits si tu vois de la fluo (quel type de coloration utilise tu ) ca dois correspondre a de l'ADN maintenant est ce que la migration ne s'est pas bien passée Est tu sur be bien avoir orienté ton Gel As tu chargé assez d'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr-sbt

- il contient un colorant (bleu de bromophénol, oranger...) qui permet de suivre la migration à l'oeil nu (pour éviter que de faire migrer l'ADN trop longtemps et éviter qu'il ne sorte du gel...).  [...] - certains contiennent également des composants qui ont la particularité de se lier à l'ADN et d'en augmenter la densité. ainsi ton échantillon reste bien au fond du puits et ne se disperse pas dans le tampon de migration.  [...]

[Biologie Moléculaire] élèctrophorèse (ADN)

Donc, si tu n'observes pas de bande dans un puits c'est que le poids moléculaire de l'ADN fragmenté n'est pas dans la fourchette de taille observable par le gel d'agarose calibré (autrement dit, ton ADN est tellement petit qu'il a pu passer a travers ce maille et que lors de la migration, il a carrément quitter le gel en migrant vers une électrode).  [...] Par contre, j'ai du mal m'exprimer, ce que je n'arrive pas à expliquer c'est pourquoi à T0 on voit une migration avec nottament une barre près du puits, à T1 la migration est de même longueur sauf que la barre près du puits apparait moins nettement, et à T2 la migration est bien visible aussi mais il n'y a plus de barre tout près du puits.  [...]

Carte de restriction d'un plasmide

Des digestions avec une ou 2 enzymes sont réalisées, les produits de la digestion sont soumis à une électrophorèse. On dtermine pour chaque puits le nombre et la taille des fragments de restriction par comparaison avec la migration de fragments d'ADN de taille connue. Les résultats sont dans le tableau suivant.  [...] Question confuse. Dans un plasmide recombinant on a un vecteur et un insert. L'ADN génomique humain a une taille d'environ 3 000 000 000 Nt. Mais je suppose que c'est la taille de l'insert du plasmique recombinant que tu veux.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de migration électrophorèse (produits bloqués dans les puits)

Je dispose de protiste et les amplifications se déroulent correctement sauf ma dernière PCR où, après migration des produits par électrophorèse (gel agarose 1%, 100V, 1h) j'ai eu comme résultats, de nombreux produits apparemment coincés dans mes puits (voir photo jointe).  [...] J'ai vérifié tous mes produits et ils sont tous corrects. Dans le doute j'ai fait une autre migration avec les produits issus d'une nouvelle PCR et je n'ai eu ce problème que sur un seul échantillon.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR: dépôts qui restent dans les puits lors de la migration

[Biologie Moléculaire] PCR. dépôts qui restent dans les puits lors de la migration.  [...] -une 2nde nested, pour laquelle le PM attendu est sensiblement le même que pour la 1ere PCR et qui me permet simplement d'ajouter 4nt à mon gène pour le clonage (utilisation d'un kit).   [...]

[Biologie Moléculaire] ARN et contaminants

Ensuite, pour tes manips sur gel, pense à mettre un marqueur de taille, c'est un controle indispensable pour pouvoir comparer la migration de tes échantillons avec quelque chose de connu (le marqueur). Cela te permet aussi de détecter tout problème de migration (pas assez ou trop migré par exemple ).  [...] donc à priori ces grosses bandes près des puits seraient de l'ADN Sinon j'ai un doute mais lorsque l'on mesure la DO à 260, on détecte ADN et ARN en même temps donc même en ayant un bon rapport (près de 1.8) ça ne signifie pas qu'il n'y pas de contaminant ADN Ce rapport permet de dire juste s'il y a ou non des protéines. C'est bien ça merci.  [...]

[Biologie Moléculaire] shifting sur sds-page anticorps

J'ai un petit problême avec des gels SDS-Page ( criterion precast gel, stainfree, 26 puits) migration dans tampon de migration et slb4X utilisé comme loading buffer.  [...] Je dis peut être une bêtise, mais ca me parait super haut comme poids moléculaire apparent pour des igG. Tu fais ta migration dans des conditions particulières.  [...]