• Forum - Puits, Anticorps, Molécule

[Biologie Moléculaire] Immunohistochimie/ Immunomarquage

En gros tu as une plaque multi-puits de faible volume où tu déposes un anticorps qui reconnaitra ta molécule d'intérêt.Il se colle sur le fond du puits.  [...] l'immunomarquage consiste en la détection d'une biomolécule en utilisant un anticorps la reconnaissant. C'est un terme plutôt générique.  [...]

[Immunologie] [Immuno]Technique RIA ou Dosage Radioimmunologique

Dans le puits il y a un anticorps contre ta molécule (ex insuline). Tu incubes ton echantillon dessus puis tu ajoutes de l'insuline marquée. Il va se créer un équilibre entre les molécules marquées et non marquées. En dosant la radioactivité du surnageant tu pourras en deduire, grace à une gamme etalon, la concentration de ton echantillon.  [...] Ce genre de test peut egalement permettre de comparer l'affinité de 2 anticorps pour une meme molécule. plus un anticorps est affin, moins il en faudra pour deplacer l'anticorps marqué.  [...]

Méthode Elisa

il faut fixer les protéines du virus au fond de puits, verser le sérum à tester dans ceux-ci. il y a alors fixation ou nn des anticorps sur la protéine puis on révèle la présence des anticorps grâce à des molécules couplées à une enzyme.  [...] 5) détection finale des anticorps secondaires par l'ajout d'un substrat. ce substrat chromogène va être métabolisé par l'enzyme accrochée à l'Ac secondaire et donner une couleur.  [...]

Plaques ELISA maxisorp, Covalink, Amino ?

en fait j'ai l'impression que quasiment rien ne s'adsorbe au fond de mes puits quand c'est mon anticorps qui est coaté par contre si je coate l'antigène pour le titre de l'anticorps (soit l'anticorps de capture soit le révélation) la ça marche super bien et j'ai meme des faibles concentrations d'antigènes par puits qui sont reconnues (2ng/mL 100µL/puits.  [...] ...) donc je voulais essayer de faire une fixation covalente de mon anticorps au fond de mes puits vu que je suis quasi sure que je lave tout (10µg/mL 100µL/puits... et en dessous ca marche moins bien...).  [...]

[Immunologie] Protocole ELISA

La détection des anticorps se fait par test ELISA. Le sang des poissons est récupéré par la veine caudale et mis à coaguler une nuit à 4°C. Le sérum est ensuite récupéré et dilué. Les antigènes proviennent des parasites. L'anticorps de détection est une immunoglobuline anti-loup obtenue en injectant des antigènes de loup dans un lapin.  [...] Les puits sont ensuite rincés. si l'anticorps secondaire n'est pas fixé, il sera éliminé. On ajoute ensuite de l' eau oxygénée, substrat de l'enzyme. Si l'enzyme est présente, l'eau oxygénée sera transformée en deux molécules d'eau et la couleur de la solution sera modifiée. Le dosage se fait par spectrophotométrie.  [...]

[Biologie Cellulaire] Clathrine=endocytose ET exocytose???

il y a formation de puits de clathrines, qui ont dans la partie extracellulaire, une protéine dite adaptatrice, qui jouera le rôle de récepteur à la molécule qui doit être endocytée. C'est l'exemple connu du LDL (grosse molécule remplie d'un équivalent de cholestérol).  [...] -Parfois, il y a sur la membrane du RTG, des protéines dites récepteur qui vont fixer certaines molécules contenues dans le RTG. Ces récépteurs sont fixés d'un côté à la molécule à transporter, et de l'autre côté à une protéine dite adaptatrice, qui permet l'attachement à un manteau protéique de clathrine qui mène tout droit vers la sécrétion controlée ou vers les endosomes.  [...]

[Microbiologie] Elisa

Salut, il existe plusieurs types de test par ELISA,soit plus précis...Sinon,ça marche sur le principe d'anticorps ou antigènes marqués.  [...] Le test ELISA classique consiste à déposer des anticorps dans le fond d'un puits, tu ajoutes l'antigène (qui est complémentaire de ton anticorps préalablement fixé), tu laves (pour éliminer les antigènes non fixés), ensuite tu ajoutes un second anticorps couplé à une enzyme et complémentaire à ton antigène, qui en présence d'un substrat va colorer ton milieu, après il suffit de mesurer l'intensité lumineuse émise.  [...]

[Biotechnologie] Test immuno-enzymatique... ELISA

On ajoute un deuxième anticorps qui se lie spécifiquement au premier anticorps. Le deuxième anticorps est marqué par un produit fluorescent, une espèce radioactive,... On peut aussi lui attacher une enzyme qui transforme un substrat (la molécule qu'on lui donne) en un produit détectable.  [...] Je crois me rappeler que tu peux te faire une bonne idée de l'expérience avec des vidéos Youtube. Les seringues à utiliser ne sont pas habituelles (en tout cas, quand on est au lycée), parce qu'elles permettent d'injecter des anticorps en même temps dans toutes les rangées de puits (plutôt que de devoir remplir un à un les 96 puits...).  [...]

[Immunologie] Différence entre la technique ELISA indirect et direct (sandwich)

Dans le cas de l'ELISA direct, tu 'coates' les puits directement avec ton antigène (Ag) d'intérêt et tu le détectes avec un anticorps (Ac) marqué. Cette méthode est donc plus chère puisqu'il faut que ton anticorps spécifique soit marqué. En gros, tu détectes la présence du virus.  [...] Dans le cas de l'ELISA indirect, tu cherches à doser les Ac dirigés contre le virus EBOLA donc tu cherches à déterminer si la personne a réalisé une réaction immunitaire contre EBOLA et donc tu détectes de façon indirecte la présence du virus. Cette méthode indirecte bien que plus longue (3 acteurs qui entrent en jeu) est plus sensible dû à l'amplification du signal et est moins chère et plus flexible grâce à l'utilisation d'un anticorps secondaire marqué.  [...]

[Immunologie] Elisa: Help pour blocage du non spé dosage d'anticorps

Je suis en train de mettre au point un dosage d'anticorps par technique elisa. J'utilise des peptides (trentaine d'AA) qui sont biotinylés et coatés sur des plaques streptavidine (Pierce) qui sont prébloquées au superblock. Le coating se fait par incubation d'1h des peptides biotinylés (dilués en PBS) dans les puits des plaques revêtus de streptavidine.  [...] Peut être que la BSA est trop grosse pour saturer des puits coatés avec des peptides d'une trentaine d'AA et du coup gêne la reconnaissance des peptides par les anticorps du sérum.  [...]