• Forum - Protocole, Dosage, Protéines

[Biochimie] Dosage de protéine

Après de nombreuses recherches, je me tourne vers vous pour essayer de mettre au point un protocole de dosage de protéines. Je dois doser les protéines contenues dans une fraction purifiée d'un surnagent de bactéries marines et je ne sais quelle méthode choisir (Lowry, Bradford, spectro UV.  [...] ..). De plus, je n'ai aucune idée d'une concentration approximative dans ma fraction et je ne sais pas du tout sur quelle gamme étalon je dois partir en terme de concentration de BSA.   [...]

[Biologie Cellulaire] Extraction de protéine du coeur

Je cherche un protocole pour l'extraction des protéines à partir d'un coeur de rat. Ainsi que quelques détails sur le dosage BCA de Pierce.Merci.  [...] Pour l'extraction, le protocole sera très différent selon que tu souhaites extraire toutes les protéines ou une catégorie seulement... il faudrait plus de précisions.  [...]

[Biochimie] Protocole de dosage de l'enzyme glycosyltransférase

[Biochimie] Protocole de dosage de l'enzyme glycosyltransférase.  [...] j'ai besoin énormément d'un protocole de dosage de l'enzyme glycosyltrasferase.  [...]

[Biologie Cellulaire] etude du niveau de phosphorylation d'une protéine en WB

Il est toujours mieux de réaliser un dosage de protéines avant un western blot, cela permet d'être bien sûr de ce qu'on dépose.  [...] je vais essayer une technique d'extraction avec des inhibiteurs, j'ai trouvé un protocole qui me semble adapté, et j'effectuerai un dosage avant de déposer.  [...]

[Biochimie] Purification de la catalase du foie de rat.

On réalise une dénaturation des protéines pour les détruire sauf la catalase. On réalise des fractionnements sur une colonne d'hydroxylapatite et on mesure l'activité catalasique et l'absorbance pour vérifier la pureté. Je n'ai pas vraiment saisi l'intérêt de cette purification et du TP.  [...] Je pense que le but était tout simplement de vous montrer comment on procède pour l'étude d'une protéine (purification, dosage, test d'activité...). Et la catalase a dû être choisie parce que les personnes qui vous font ce TP ont un protocole déjà préparé pour cette enzyme.  [...]

[Biochimie] Dosage spectrophotométrique des protéines

Il y a le nanodrop pour doser les protéines. Dans le principe, cela reste de la spectrophotométrie puisqu'on dose l'absorbance d'une goutte d'échantillon déposée sur une lentille qui émet un faisceau de lumière à 280 nm. L'avantage est qu'il n'y a pas besoin de cuve en quartz pour le dosage (à la différence des spectrophotomètres classiques pour le dosage de protéines sans coloration), il n'y a pas besoin de coloration, et surtout très peu de matériel biologique est utilisé pour le dosage puisque le volume de la goutte déposée pour le dosage est de l'ordre de 1 à 3 µl.  [...] Vous avez aussi le dosage par Warburg et Christian. Il permet la séparation des acides nucléiques et protéines selon un ratio propre à la méthode.  [...]

[Biochimie] Dosage des protéines totales méthode de Bradford.

Nous avons réalisé avec le sérum d'albumine bovine SBA comme protéine standard, une courbe étalon à six points de concentrations croissantes ( 0. 0,25. 0,5. 1. 1,4. 2 mg SBA/ml).  [...] Dans les deux cas quand tu testeras ton tube contenant ta protéine et le colorant, tu va obtenir une DO que tu repporte sur le graphe que tu a tracer manuellement ou c'est le spectro qui le fait automatiquement.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot sur des echantillons de foie murins

oui, je me ferai aider. Mais avant j ai quand meme besoin d un protocole.Le probleme c'est que je pars de rien. Dans le labo, ils ont dosè d autres proteines, pas celles la. De plus, ils le font souvent sur des cellules en culture. Cest pour cela que je suis un peu perdue. J'attens ton message demain.  [...] Ton protocol m'abeaucoup aidé. J'ai extrait mes proteines et fais mon dosage de Bradford. Par contre, jai un soucis, mes proteines sont très concentrées. Du coup, pour avoir les 20µg qu'il faut pour le gel, j'ai des valeurs negatives. Que faire dans ces conditions Estce que je peux diluer mes ech Et si oui, comment pourrais-je les quantifier a la fin.  [...]

[Biochimie] Extraction et dosage des protéines

Ensuit je transfert le tout dans du Ripa et j'extrait les protéines. Je me retrouve encore avec plus ou moins de cellules sanguines dans ma solutions dues à la lyse. Je n'ose pas l'éliminer car se trouvent également mes protéines d'intêret. Ceci affecte mon dosage (méthode de Bradford).  [...] Je suis obligée de beaucoup diluer pour éviter ce dosage parasitesui de plus et inégal selon mes échantillons. En fait quand je colore au bleu de coomassie un gel contenant mes protéines après électrophorèse, je m'aperçois que je ne retombe pas sur mon dosage (certains profils protéiques sont plus intenses alors que moins concentrés que d'autres lors du dosage).  [...]

[Divers] Dosage Vanilline par HPLC

J'ai le protocole d'extraction, mais je ne trouve pas de protocole pour le dosage par HPLC.  [...] letters in applied microbiology 2007 Jan.44(1).62-7. Vanillin production from simple phenols by wine-associated lactic acid bacteria.   [...]