• Forum - Protocole, Coloration, Nitrate d'argent

[Biochimie] coloration nitrate argent

je viens chercher de l'aide pour un problème de coloration au nitrate d'argent. J'essais de valider un protocole de coloration au nitrate d'argent donc, pour colorer des protéines sur un gel d' agarose.  [...] La révélation des protéines par le nitrate d'argent sur gel d'agarose est apparemment possible ( http.//cat.inist.fr/aModele=afficheN&cpsidt=3248811 ), il reste à savoir si vous utilisez effectivement le bon protocole.  [...]

[Biochimie] Purification sur colonne échangeuse d'ions

Bon, maintenant, c'est vrai que c'est une purif' sur une colonne. C'est un peu étonnant. Ce que tu peux faire, foutu pour foutu, c'est de faire bouillir un peu de ta résine chargée pour vraiment être certain de tout casser et de tout décoller. Ensuite, zou, dans un gel pour voir ce qu'il y a là dessus (en WB ou en simple coomassie/bleu colloidal).  [...] Non pas d'activité facilement détectable. On la suit par absorption à 280nm et apres on confirme sur gel et coloration au nitrate d'argent.  [...]

[Biochimie] Electrophorèse colorée à l'argent

Je fais en ce moment des électrophorèses au nitrate d'argent et j'essaie de déterminer la limite de détection de ce type de coloration pour différentes protéines (BSA, collagène...).  [...] Je voulais savoir si, pour colorer à l'argent, le nitrate d'argent est le seul réactif possible. Je dispose en effet d'acétate d'argent, puis-je faire quelque chose avec ça.  [...]

[Biochimie] coloration nitrate d'argent

Résultat intriguant aujourd'hui sur un gel de polyacrylamide... Apres coloration au nitrate d'argent, les protéines sont bien révélées et prennent une teinte marron, par contre une bande très particulière prends au contraire une coloration grise... je n'avais jamais vu ca avant.  [...] Comment se fait-il que ces spots (ou bandes) prennent une coloration grise ça je ne sais pas. Le nitrate se fixe sur les groupements carboxyliques et soufrés des chaines latérales. Peut être une histoire de composition en acides aminés et de concentration.  [...]

[Identification] IPG strip gel combiner a une extraction au PBS

J'aimerais savoir si vous avez un protocole me permettant d'utiliser une extraction proteique au PBS (cellule vegetal, hypocotyl de soja) suivi d'une separation utilisant la methode IPG (pour ensuite effectuer une electrophorese et un CBB staining).  [...] Vour pourriez peut être tenter également un coloration au nitrate d'argent qui est bien plus sensible que le bleu de Coomassie afin de voir s'il n'y a pas de spot du tout ou si la concentration en protéines est seulement juste un peu faible.  [...]

Révélation protéines au AgNO3

Voici ce que j'ai trouvé. Etant mille fois plus sensible que le bleu de coomassie, la coloration au nitrate d'argent permet de détecter des spots contenant 0,1 ng de protéines. Elle présente néanmoins certains inconvénients. la stSchiométrie de la coloration n'est pas totalement linéaire, la reproductibilité est difficile à obtenir et certaines protéines sont peu ou pas colorées par cette méthode.  [...] pour la linéarité. les colorations au nitrate d'argent sont sensibles, mais dépendent de la composition en acide aminés et donc ne sont pas linéaires. On ne peut pas utiliser cette méthode pour comparer des concentrations de protéines.  [...]

dégradation de protéine recombinante

et concernant la purif par gel filtration je n'en ai jamais fait qu'est ce que tu utilises comme matériel chez qui tute fournis y a-t-il un kit qui marche mieux qu'un autre ou un super protocole.  [...] La seule chose que je peux dire c'est que lorsque je fais un immunoblot avec un anticorps anti-histidine je n'observe que ma protéine d'intérêt mais cela n'exclue pas que la protéine ait perdu son étiquette histidine lors de sa dégradation et que les bandes observées par coloration au nitrate d'argent ne soient pas ds formes de dégradation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Révélation au nitrate d'argent

Attention les colorations au nitrate d'argent sont sensibles, mais dépendent de la composition en acide aminés et ne sont pas linéaires. On ne peut pas utiliser cette méthode pour comparer des concentrations de protéines.  [...] Attention les colorations au nitrate d'argent sont sensibles, mais dépendent de la composition en acide aminés et ne sont pas linéaires.  [...]

[Biochimie] gel 2D

j'ai commence a faire le gel bi-dimensionnel mais a chaque fois j'obtiens des stries dans le gel qui cachent les spots, en plus la coloration au nitrate donne un fond un peu fonce. avez vous des conseils qui pourraient améliorer mes gels et merci.  [...] Pour la coloration au nitrate d'argent, j'obtiens un fond du gel foncé uniquement dans la partie supérieure du gel, j'obtiens des sortes de stries qui cachent les spots, si je réduis le temps de développement des spots dans la partie inférieure ne vont pas apparaitre, sachant que j'ai fais une dialyse pour mon échantillon et c'est toujours la meme chose, le tampon d'extraction ne referme pas de tris, j'ai essaye d'éliminer toute trace de sels.  [...]

[Biochimie] dosages des chlorures par la méthode de Charpentier-Volhard

Dans chaque essais on y met. 2ml d'eau physiologique diluée au 1/3 10ml d eau distillé 2ml d'acide nitrique 10ml de nitrate d'argent et 1ml d ammonium de fer3.  [...] Pour le moment je suis bloqué a cette endroit la il me reste à trouver la relation a l equivalence et l'exprécion de la concentration de Cl.   [...]