• Forum - Protocole, Amplification, ADN

[Biologie Moléculaire] protocole pour test de paternite

[Biologie Moléculaire] protocole pour test de paternite.  [...] je suis stagiare dans un laboratoire ou je dois mettre en route le protocole de realisation du test de paternite.le laboratoire dispose d' un thermocycleur pour l'amplification de l'adn. quelqu'un peut m'aider concretement a mettre au point ce protocole merci.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème d'amplification de gènes bactériens

Dans mes travaux je dois amplifier des genes d'interets du genomes de plusieurs bacteries. Mais je n'arrive pas a amplifier ces genes, des bacteries individuellement. Mais lorsque je met ensemble tous les ADN de mes bacteries j'ai des amplification apres PCR.  [...] Les causes peuvent être nombreuses...Qu'avez-vous essayé de faire pour résoudre ce problème Quelle différence y a-t-il au niveau du protocole entre l'amplification avec un seul type d'ADN bactérien et plusieurs types d'ADN bactériens, hormis la quantité d'espèces d'ADN bactérien différent dans le mélange bien entendu Mettez-vous plus d'ADN dans un cas que dans l'autre.  [...]

[Génétique] PCR - Calcul du nombre de cycles

Pour la 4eme question, du coup je ne sais pas s'il faut amplifier juste le fragment qu'on obtient avec les amorces ou toute la sequence présentée.   [...] Ensuite, vu que tu sais comment se comporte la quantité d'ADN a chaque cycle d'amplification, il suffit de calculer le nombre de cycles pour arriver a 1µg.  [...]

[Biologie Moléculaire] Race_pcr

J'ai cloné une séquence partielle d'ADNc et confirmé par un séquençage celle-ci. Par contre ma séuence d'ARNm qui a été cloné en ADNc n'était pas complète, il me manque la fin de la séquence donc l'extrémité 3'. Quel sont les étapes d'un protocole RACE (rapid amplification of cDNA Ends) me permettant d'identifier cette partie manquante.  [...] MERCI beaucoup, malgré ma faute de frappe j'ai réussit avec vos explications et une amie à découvrir mon erreur.   [...]

[Biologie Moléculaire] Questions relatives à la PCR

Ainsi, je reformule. Lors d'une détection de la séquence Alu, qu'est-ce qui pourrait expliqué que j'obtienne une très faible quantité de produits PCR après amplification. La question ne se limite pas à cette expérience. Ce que je veux savoir c'est.  [...] Simplement pour vous expliquer le protocole. je devais d'Abord isoler l'ADN de quelques potes (et moins potes héhé) à partir de cellules buccales. J'utilisais ensuite du chelex pour absorber les produits de lyse cellulaire pouvant inerférer avec le processus d'amplification du PCR.  [...]

[Biologie Moléculaire] Explications rapides sur la PCR

Enfin, quelqu'un peut-il me faire un petit résumé rapide des avantages / inconvénients / spécificité de ces deux méthodes ( amplification par plasmide, et amplification par PCR ).  [...] La PCR est un processus de multiplication exponentielle. C'est à dire qu'au bout de 30 cycles, on aura théoriquement 1 milliard d'amplicons à partir d'un brin d'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Connaissez -vous un outil d'analyse d'affinité d'un primer pour une séquence ?

Bien, (rappelez-vous que ma molécule d'ADN est simple brin) je travaille actuellement à une expérience d'amplification par cercle roulant (rolling-circle amplification, RCA).  [...] Une amplification (géométrique) exponentielle dite hyperbranched RCA (HRCA), également connue sous le nom de ramification ou RCA en cascade, est réalisée en utilisant une deuxième amorce avec une séquence identique à une partie du cercle d'ADN.  [...]

rDNA ou rRNA?

L'amplification a partir du rDNA me semble avoir plus d'avantage qu'a partir du rRNA. L'ADN est plus stable, moins degradés, ensuite il n'y a pas de RT necessaire, une etape en moins, sans parler de l'extraction d'ADN qui est souvent plus facile a faire.  [...] En gros, si tu as une ou 10^9 cellules d'un certain type, tu n'obtiendras qu'un seul profil en amplifiant l'ADN. Par contre en travaillant à partir d'ARN (proportionnel au nombre de cellules en activité) et en combinant celà avec un système de quantification de l'amplification (voir le mot clé.  [...]

applications de la PCR

D'ailleurs je suppose que la PCR doit présenter quand même certaines limites. par exemple, l'amplification d'ADN non souhaité (contamination d'un prélevement par d'aoutres ADN,...).  [...] Mais en provoquer, non je ne vois pas. Etant donné que la PCR sert à amplifier un fragment d'ADN, il s'agit simplement d'obtenir à la fin une quantité beaucoup plus grande de l'ADN initial, donc par définition (et en dehors des amplifications parasites et des contaminations), on aura exactement le même ADN qu'au départ.  [...]

[Génétique] Hybridation Génomique Comparative (CGH)

Ma deuxième question.Je ne comprend rien au marquage par fluorescence, déja, comment peut n'y avoir une hybridation égal et donc absence de fluorescence Et ensuite pourquoi fluorescence rouge =Excès d'ADN tests et délétion, Et pourquoi fluorescence rouge=Excès d'ADN Test et amplification(amplification de quoi d'ailleurs).  [...] Cependant au sujet des couleurs et de leurs interprétations,je n'arrive pas à comprendre,la notion d'amplification dans le cas ou c,est vert.  [...]