• Forum - Protocole, ADN, Volume

[Biologie Moléculaire] Marquage Dig en Klenow, concentration de réactifs

J'utilise une DIG-11-dUTP. Le protocole mentionne que pour de 10ng à 3ug d'ADN porter à un volume de 15 ul avec H2O, je dois y ajouter 2 ul de DIG/dNTP mixture qui doit être. 10X concentrated. 1mM dATP, 1mM dGTP, 1mM dCTP, 0,65 mM dTTP et 0,35 mM DIG-11-dUTP à pH 7.5.  [...] Où Ci = concentration initiale de ton composé, Vi son volume initial (ce que tu veux savoir), Cf sa concentration finale (ce que tu désires avoir) et Vf le volume final (le volume dont tu as besoin pour ta réaction et un petit peu plus).  [...]

Precipitation adn plasmidique

Je cherche donc à precipiter mon adn pour le reprendre dans un volume plus petit, quel est le protocole à utiliser.  [...] Autre solution tu rajoute a ta culture sur la nuit un peu de chloramphenicol pendant quelques heures. Ca bloque la multiplication des bacteries mais n'affecte pas pas la replication de l'ADN. donc tu augmente la quantité de plasmide dans tes bacteries.  [...]

[Biologie Moléculaire] precipitation ADN

Dans mon protocole pour precipiter de l ADN, on me dit de precipiter a froid avec NaCl et ethanol100 puis apres centri tout ça, de rincer avec de l ethanol70...et je suis pas sure de savoir a quoi ça sert, et pourquoi pas de l ethanol100.  [...] Ce qui doit être écrit dans votre protocole c'est que l'on reprend un volume V d'ADN dans 2V d'éthanol absolu non Si l'on fait le calcul, la concentration finale en ethanol est ~70%.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ADN génomique

j'ai un protocole super simple et tres rapide, mais ca ne différencie pas l'ADN de l'ARN. Si tu es géné par une contamination ARN pourquoi ne pas mettre de la RNAse dans ton tube.  [...] en suivant ce protocole, j'arrive à avoir une concentration d'ADN de 400 ng/Ml mais toujurs j'arrive pas à le digérer(dans un grand volume).  [...]

[Biologie Moléculaire] Protocole digestion

Je me demandais si cette quantité de plasmide est donc suffisante pour ce que je veux faire (c'est la toute première fois que je fais un protocole de digestion ).  [...] Le top pour la digestion (selon protocole promega/ NE Biolabs, teste et approuve par tout le labo) C'est 50 uL volume final (ADN purifie, pas tout juste sorti de PCR), et max 2 uL d'enzyme. Un volume plus petit ca coupe mal, et plus d'enzyme au mieux ca change rien, au pire ca coupe mal ou avec activite star.  [...]

[Biologie Moléculaire] protocole extraction ADN tissus formolés et non inclus en parffine

[Biologie Moléculaire] protocole extraction ADN tissus formolés et non inclus en parffine.  [...] Pour les manips de ChIP, on extrait de l'ADN de cellules crosslinkées au formaldéhyde (formol si tu veux) donc ce genre de protocole pourrait coller. Si jamais tu t'orientes vers ce genre de protocole, attention à bien digérer à la protéinase K avant extraction de l'ADN.  [...]

interpretation d un IRM

-. port de lentilles ou lunettes tres jeune ).De tres nombreuses operations et hospitalisations tout bébé et durant son enfance d où un parcours scolaire irregulier ( pas d ecole maternelle et par consequent des problemes en motricite fine, puis ecole primaire et formation professionnelle ).   [...] PROTOCOLE D EXPLORATION[/U].Axial Flair, volume T1 gadolinium.  [...]

[Biologie Moléculaire] un protocole fiable pou extraire l'ADN

je fais des extraction d'ADN à partir de sang humain atteint par le VIH,j'ai pas réussi a avoir un protocole convenable surtout pour la lyse des globules blancs.j'aimerais bien avoir une technique convenable et surtout fiable parce que mes ADN sont fragmentés et de mauvaise qualité(avec le détail des quantités de chaque réactif dans chaque solution ou bien simplement avoir la gentillesse de m'envoyer des sites ou des liens qui peuvent m'aider)merci infiniment.  [...] sinon je commence normalement par la lyse des globules rouges plusieurs lavages( solution.Tris,MgCl2,NaCl)et puis celle des blancs par (Tris HCl,EDTA,Nacl, et SDS..proteinase K...aprés éthanol absolu.   [...]

extraction phénol chloroforme

quesque tu appeles une miniprep car le protocole de miniprep (autre que par colone) inclu une etape de phenol chloroforme, qui permet de denaturer les proteines et donc de debarasser l'ADN des proteines.  [...] Dernier point de comparaison, qui n'engage que moi, quand on fait un protocole manuel, généralement, on sait ce qu'on fait, pourquoi, on reflechit un peu et une erreur peut etre rattrapable. Pour les kits, le protocole consite souvent à faire passer des sauces A B ou C sur une colonne/filtre, cela est (parait) facile et on a vite fait d'intervertir 2 sauces ou de jeter l'ADN.  [...]

Utilisation de souches lyophilisées- Microbiologie

Attention, 10E6 n'est pas une concentration mais une quantité. Est-ce qu'on te demande d'avoir 10E6 UFC dans un volume que tu choisis ou une suspension à une concentration de 10E6/mL par exemple.  [...] Il faut ensuite que tu me proposes un protocole qui va me dire quel volume initial je prends (dans les 2 mL, je prélève combien) et jusque quel volume final je complète, pour obtenir la ô combien merveilleuse suspension à 10E6 UFC/mL.  [...]