• Forum - Protéines, Tampon, Beta

Recepteur à l'insuline en SDS PAGE

Ce n'est pas le tampon de migration qui contient du beta-mercapto, c'est le tempon dans lequel est repris les protéines laemli. Cette etape, denature totalement la proteine (pont S-S compris). Ensuite la presence de SDS permet de faire migrer les protéine uniquement en fonction de leur poid moleculaire apparent.  [...] Ce n'est pas le tampon de migration qui contient du beta-mercapto, c'est le tempon dans lequel est repris les protéines laemli. Cette etape, denature totalement la proteine (pont S-S compris).  [...]

[Biochimie] Protocole de purification d'une protéine, vos avis

on réalise l'élution Elution des protéines non retenues par le support avec une solution tampon phosphate (on m'a parlé de pH décroissant ).  [...] on réalise l'Elution des protéines adhérée avec un tampon de pH inférieure au pHi de la beta galactosidase (avec un pH décroissant ) celle est chargée positivement et se décroche du support.  [...]

[Biochimie] purification proteines

Voila j'ai une question qui m'est venue à l'esprit. pourquoi utilise t-on du beta-mercaptoethanol dans le tampon d'elution d'une proteine et dans le tampon de dialyse. Je pensais que le beta-mercaptoethanol etait une reducteur qui denaturait la proteine donc à la fin de la purif la proteine devrait donc être inactive.  [...]

[Biochimie] Interaction protéine/protéine - ultrasons

Ensuite en fonction de ton tissu, il faut le broyer (dounce par exemple) dans ce tampon, centrifuger pour éliminer les débris et récupérer le surnageant. Tu devrais avoir des protéines natives.  [...] d'abord le cerveau est plongé dans l'azote liquide, et ensuite isopentane pendant 10 sec avant de le conserver à -80°C... D'ailleurs pendant que j'y suis, penses-tu que ce protocole peut abîmer les membranes nucléaires, ce qui pourrait contaminer les protéines du cytosol par des protéines nucléaires ou inversement En effet, je vais aussi faire un fractionnement subcellulaire avec un tampon sucrose EGTA MgCl2, inhib proteases.  [...]

[Biologie Moléculaire] Cross-linking

bjr, svp j'aimerai savoir à quoi servent le KCl et le PBS dans une réaction de cross-linking ou je regarde une interaction entre 2 protéines. sachant que les tampons de mes protéines contiennent du KCl. mon mixte comprend. les protéines, du PBS 10, le BMH( agent pontant) le KCl et H2O.  [...] par contre j'aimerai aussi savoir si c'est vrai que le KCl permet d'augmenter la force ionique concernant un band shift( interaction ADN-protéines) le Tris joue t-il le rôle de tampon( comme le PBS).  [...]

[Biochimie] tampon de lyse

juste une petite question, je travaille sur des cellules 293-t et lorsque je lyse certaines protéines restent insolubles, quelqu'un aurait-il une idée pour un tampon amélioré qui me permettrait de solubiliser ces protéines en vu du western.  [...] Qu'est ce qui te fait dire que tes protéines d'intérêt ne sont pas solubilisées par le tampon de lyse Les protéines que tu regardes sont-elles membranaires, localisées dans un sous-compartiment cellulaire particulier, les surexprimes-tu Comment lyses-tu tes cellules (composition tampon, étapes physiques de lyse (choc thermique, piston Dounce, vortex, sonication,...)).  [...]

[Biochimie] SDS page

Pour le marqueur je n'est pas déposer, mais j'ai utiliser d'autre protéines d'autres collègues et qui ont montrer des bandes sur le gel.  [...] C'est pas tellement le volume qui compte mais la quantité de protéine. Je trouve aussi que c'est trop de protéine pour avoir une belle migration.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ADN plasmidique

Digestion enzymatique de la paroi et/ou lyse mécanique des cellules (par exemple avec des micro billes en ver dans un tube que tu vortex en présence des cellules bactériennes). Il faut procéder à cette lyse dans un tampon de lyse contenant notamment de l'EDTA pour protéger le matériel génétique des DNAses et éventuellement des dénaturant protéiques tel que le SDS et le béta-mercaptoéthanol.  [...] A oui aussi. le SDS sert également a désorganiser les membranes car c'est une molécule amphiphile qui va s'y insérer. vous pouvez également procéder a un choc thermique pour fragiliser les membranes.   [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction protéines pariétales

Dans le but de faire un western-blot avec un anticorps (polyclonal) je me lance dans des extractions de protéines. Seulement (pas de bol) ma protéine d'intéret est ancrée dans le peptidoglycane de ma bestiole de façon covalente (motif LPXTG). Pour info je bosse sur une bactérie G+ qui a la mauvaise idée de résister au lysozyme.  [...] J'ai une ou deux idées sous le coude. partir sur des volumes d'extraction + importants et précipiter les protéines au TCA tenter un protocole d'extraction des protéines en pH alcalin.  [...]

chromatographie échangeuse d'ions

- La force ionique. Plus le tampon utilise contient de sel, plus les proteines se decrochent. A partir de 500 mM, quasiment aucune proteine ne tient sur une colonne quelque soit le pH.  [...] je pense que tu peux également regarder la composition de ton tampon d'élution. S'il contient des ions Na+, ce qui est souvent le cas, ces ions, de surcroit plus petits que tes protéines, vont entrer en compétition avec les protéines fixées, et ainsi faciliter leur élution.  [...]