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taille des tags

y a-t-il qq'un qui connait un site qui donne les tailles de tous les tags qu'on peut fusionner aux protéines Je cherche en particulier la taille de l'étiquette c-myc.  [...] 26 kDa pour la GST, le tag 6his fait donc 6 acides aminés. les autres, je ne sais pas.   [...]

[Biologie Moléculaire] Sequence d'une amorce pour PCR

Ma question est pourquoi il y a t-il 7 acides aminés entre les codons qui vont se lier à l'ADN et les 6 His A t'on choisi des acides aminés particuliers pour l'après codon stop.  [...] L'étiquette histidine est souvent, quant à elle, utilisé pour faire des banques génomiques et de retrouver un fragment particulier.  [...]

[Biochimie] Comment optimiser le transfert (en western blot) des protéines de haut poids moléculaire ?

Le dot blot marche donc c'est plutôt bon signe, même si ça n'exclue pas tous les artefacts possibles liés à ton anticorps. S'agit-il d'un anticorps polyclonal ou monoclonal directement dirigé contre ta protéine ou d'un anticorps dirigé contre une étiquette que tu as ajouté Quand tu utilises cet anticorps, tu ne vois pas ta protéine mais vois-tu d'autres bandes plus petites ailleurs sur le gel Si tu vois des bandes plus petites, s'agit-il d'une bande unique (dans ce cas, il s'agit probablement d'une reconnaissance non spécifique d'une protéine qui n'a rien à voir) ou de plusieurs bandes et en particulier de bandes proches les unes des autres (dans ce cas c'est sans doute une dégradation partielle).  [...] Certaines protéines notamment les plus grosses et les membranaires restaient alors piégées, elles restaient donc tout en haut du gel (dans le gel de concentration) et le WB était donc systématiquement négatif. Si tu es dans cette situation,tes échantillons doivent être fortement turbides et par ailleurs ils doivent extrêmement visqueux voire carrément pateux et le chargement doit être particulièrement difficile.  [...]

[Biochimie] GST pulldown

en gros l'étiquette GST permet de purifier les protéines étiquetées en utilisant des billes sur lesquelles se fixent l'étiquette. Apres avoir récupéré tes protéines, tu peux les déposer sur un gel d'acrylamide et faire un western blot avec par exemple un anticorps anti-HA.  [...] Les deux méthodes ont leurs avantages et inconvéninents. le tag myc est très petit (environ 1 kDa), par contre son utilisation est couteuse car il doit être reconnu par un anticorps. A l'inverse, le tag GST est une vraie protéine d'environ 26 kDa, dimérique (ça peut avoir des conséquences sur la cible), mais bien plus simple et moins couteuse a utiliser (l'élution se fait par le glutathion).  [...]

asepar...ou qq chose comme ça?

On te parleras de plk1 qui phosphoryle la cohésine qui devient sensible à une caspase particulière. la séparase (elle même phosphorylée par CDK1/cycline B)).  [...] De mémoire, l'ubiquitine est utilisée comme une étiquette par la cellule pour la dégradation des protéines dans le lysosome.  [...]

Traduction de termes anglais issus d'un article.

FLAG c'est une étiquette protéique qu'on ajoute aux protéines (protéine de fusion) justement pour faciliter sa détection, ou sa pr écipitation (avec un anticorps anti flag).  [...] Pour FLAG c'est aussi ce que j'aurais dit à la base, mais dans l'article avec un petit Ctrl+F toutes les apparitions de FLAG se font quand ils nomment le vecteur (pCMV-FLAG), je l'ai pas retrouvé en dehors du vecteur, pour designer la protéine, donc pas sur que dans le contexte ca soit ca, si (pas lu l'article en entier).  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique GST-Pull Down

Ah donc si je comprend bien, cette technique permet de récuperer des protéines En gros on se sert de l'étiquette GST de la même manière qu'on se sert des billes pour l'immunoprécipitation.  [...] c'est ça. Le truc c'est qu'il n'existe pas toujours d'anticorps dirigés contre les protéines d'intérêt ou d'anticorps bien spécifiques alors que ceux qui reconnaissent la GST le sont. Il existe aussi des techniques pour récupérer la protéine sans le tag à la fin, par exemple en clonant un site de restriction SapI entre le cDNA de la prot et celui de la GST.  [...]

[Biotechnologie] purification d'une protéine

Je ne suis pas du tout experte en purification de protéines mais en lisant les différentes étapes de la manip je me dis qu'en insérant la séquence codante pour la ligase dans E. coli, ils ont peut être en même temps créé une protéine de fusion avec une étiquette (par exemple GST ou Tag) et ont pu ensuite purifier cette protéine de fusion sur une colonne d'affinité.  [...] ça pourrait être du à l'utilisation d'une technique de TAP-tag. Tu fusionnes ton ORF à une étiquette tripartite. 2 motifs permettant la purification (6His et prot A par exemple) séparés par un site de coupure par une protéase (TEV en général).  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteur pET15b

Il me semble qu'il fait office de site de clivage permettant de retirer le HisTag de la protéine (on a pas la thrombine entière dans le plasmide. juste quelques nucléotides).  [...] Pour pr éciser, dans la protéine exprimée, entre l'étiquette et ta protéine d'intérêt se trouve un site de clivage par la thrombine, qui est une protéase.  [...]

Purification et extraction des protéines....

On nous fournit a la base du travail des Cellules d'E. Coli Contenant la protéine DsbA3 avec une séquence contenant une étiquette poly histidine.  [...] Le [His]6 tag va vous permettre (1) de purifier et (2) de faire vos WB facilement en utilisant un anticorps dirigé contre lui plutôt que de courir contre un anticorps dirigé contre la protéine.  [...]