• Forum - Protéines, Extraction, Phase, Organique

extraction d'ADN

Generalement pou run extraction d'ADN on n'a pas besoin de proteinase K a moins que ca ne soit une spécificité des cellules sanguines.  [...] L'extraction phenol/chlorophorme permet en general de separer la phase acqueuse (ou se concentrent les acides nucleiques) et la phase organique (dans la quelle les proteines se solubilisent plus facilement que les acides nucleiques apres avoir ete denaturees par le phenol).  [...]

[Biologie Cellulaire] protéines dans la phase organique?

Moi j'ai fait une extraction éthanol/chloroforme sur un broya de foie et les protéines étaient bien dans la phase supérieur aqueuse.  [...] je n'ai jamais vu de proteines aller dans la phase organique... mais en revanche il peut se produire parfois une inversion de phase (la phase organique passe au dessus).  [...]

Solubilite des phospholipides

6. Centrifuger 15 minutes, 500 g. Récupérer la phase organique. Réextraction sur la phase aqueuse des lipides restant avec une solution Chloroforme/méthanol/NaCl (86/14/1, v/v/v).  [...] Attention, ce protocole marche très bien pour les tissus animaux, mais je ne l'ai jamais testé sur du tissu végétal. Ceci dit, contrairement à une extraction protéique, tu ne devrais pas te retrouver avec la paroi sur les bras, puisque ce qui t'intéresse est la phase organique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN ethanol 70%

Je prépare des TP de biologie moleculaire à la fac, dont un sur l'extraction des ARN. Après avoir extrait l'ARN des cellules avec du TRIZOL, on obtient 2 phases, la phase organique (phase inferieure avec phénol et chloroforme) et une phase aqueuse avec les ARN.  [...] De façon un peu plus moléculaire, l'ADN précipite car il n'est pas soluble dans l'alcool car celui-ci le déshydrate, tandis que les sels que l'on ajoute pendant l'extraction neutralisent les charges négatives de l'ADN (l'apport de charges positives permet la création de solides).  [...]

[Biologie Moléculaire] solubilité ADN, ARN dans le phénol

L'extraction d'acide nucléique est quelque chose de nouveau pour moi alors je cherche des infos. Aux vues de ce que j'ai trouvé sur le net, avec du phénol acide, il semble assez clair que l'ARn est dans la phase aqueuse et que l'ADN soit dans la phase phénolique (avec des traces dans la phase aqueuse).  [...] Pour l'extraction des ARNs, le P/C/IAA doit être à pH acide (~5), ce qui va dénaturer l'ADN pour se retrouver dans la phase organique et pour ne trouver que les ARN dans la phase aqueuse.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ARN

Le phénol sépare les molécules organiques (donc les protéines) des acides nucléiques. Les molécules hydrophiles se retrouverons dans la phase aqueuse (l'eau) les protéine insoluble seront à l'interphase phneol/eau et le reste dans le phénol.  [...] La phase organique est en bas contient les protéines et les débris, l'anneau blanc à l'interphase ce sont encore des protéines et des lipides, et dans la phase acqueuse il y a TOUS les acides nucléiques.  [...]

demande d'infos!!! extraction de l'ADN

- Pour cela, il faut utiliser du phenol pH8 ou 4 (je ne sais plus... l'un est utilisé pour l'extraction d'ARN et l'autre pour l'extraction d'ADN).  [...] - Après avoir placé le melange contenu cellulaire/phenol, il faut agiter afin que l'ADN puisse se retrouver dans la phase aqueuse que l'on recupère après avoir centrifugé. 2 phases sont visibles. la phase aqueuse au dessus contenant l'ADN, la phase organique contenant l'ARN et l'interphase contenant les protéines.  [...]

Expériences en génétique…

Salut Piwi, merci de ta réponse. J'aimerai toutefois savoir si le morceau d'ADN, qui est intorduit, ne contient que le gène qui code la protéine en question Et comment isoler ce gène(la méthode d'extraction et la source de provenance) Je ne pense pas qu'on peut effectuer une telle expérience chez soi, même s'il l'on a un minimum de matériel, est-ce que je me trompe.  [...] Pour l'extraction d'ADN. quelques conseils. L'oignon c'est bien, mais ça sent fort. Je l'ai fait, et mes mains ont senti l'oignon pendant 3 jours... Ça marche très bien aussi avec la tomate ou le kiwi. En plus on voit mieux la différence entre la phase acqueuse rouge ou verte et la phase organique incolore.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème génotypage souris mutées

En fait, pour la petite histoire, je suis arrivée dans le labo en janvier et ils avaient déjà des soucis, à l'époque les extractions étaient sous-traitées à un autre labo (robot Qiagen). J'ai tout repris à zéro et j'ai fait moi-même les extractions avec le Direct PCR, j'ai modifié un peu le programme de la PCR et ça a très bien marché jusqu'à ce que je commence à avoir des blancs (aucune bande pour certaines souris) puis plus rien du tout.  [...] - pour l'étape d'extraction au phénol/chloroforme, je vais essayer mais avec du Trizol (car je n'ai pas de phénol) en adaptant le protocole car dans ce cas l'ADN est dans la phase organique.  [...]

Dosage d'un principe actif dans une matrice biologique

Ensuite, vu qu'il reste encore quelques protéines(anticorps et cie) dans ton sérum en plus de ton médicament, il faudra passer par une étape d'extraction. extractions liquide-liquide ou liquide-solide(SPE). Le sérum est considéré comme un milieu aqueux. Pour l'extraction liquide-liquide, il faudra donc utiliser un solvant organique approprié non miscible à l'eau.  [...] J'ajouterai également que pour l'extraction, l'extraction liquide-solide semble plus avantageuse que la liquide-liquide pour plusieurs raisons. on peut la coupler en ligne avec de la chromato, le choix de phases stationnaires est large et donc on arrive toujours à en trouver une qui correspond à notre soluté d'intérêt etc etc.  [...]