• Forum - Protéines, Expression, Intérêt

[Biologie Moléculaire] Ligation ADN plasmidique insert

et on l'a introduit dans une bactérie de souche E.Coli alors que dans tout les exercices fait en TD c'était des plasmides qui était modifié et intégré dans une bactérie.   [...] On s'en sert parfois comme vecteur vecteur d'expression chez Coli par fusions des gènes d'intérêt avec les protéines P8 et P3,  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteur de clonage et autre sur le web

Naviguant sur le web,je me demandais si il n'existerait pas des sites proposant des vecteurs de clonage ou de transfection utilisés dans la biologie moléculaire(de par la je veux dire rétrovirus ou adénovirus (totalement inoffensif pour l'homme ))ou plus hasardeusement des souches microbiennes servant a l'extraction plasmidique car je vous l'admet pour l'instant mes recherches se révèlent fort laborieuses,aussi en votre aide j'espère m'extraire de ce pénible problème.   [...] Classiquement pour ce genre d'expérience, on utilise les souches E. coli DH5 alpha pour l'amplification d'un plasmide d'intérêt (elles sont faciles à transformer), et pour l'expression de protéines recombinantes, ce sont plutôt les E. coli BL21. Il existe des variantes bien sûr mais ce que je veux dire c'est que suivant l'utilisation que tu compte faire, les outils à choisir seront différents.  [...]

[Biotechnologie] Global Analysis of Protein Activities using proteome chips

The yeast expression strains contain individual plasmids in which the correct yeast ORFs have been shown to be fused in-frame to GST by DNA sequencing. The proteins were expressed in yeast to help ensure that the proteins were modified and folded properly.  [...] Ils purifient ensuite la protéine d'intérêt (grâce à la séquence GST). Sur les 1152 protéines différentes produites en même temps par cette méthode, ils en sélectionne aléatoirement 60 pour les tester par WB (afin de vérifier l'expression de la protéine d'intérêt).  [...]

GFP et mcherry

1) Si je comprends bien on utilise les gènes qui codent pour la GFP et la mcherry, qui seront insérés (liés au promoteur) dans un transgène, quand ceux ci seront traduits en protéines il y aura fluorescence et donc on pourra détecter si il y a eu expression de notre gène d'intérêt.. Ai je bien compris.  [...] Pas vraiment.. il s'agit juste de révéler l'expression d'un gène... Pour cela on introduit par agroinfiltration plusieurs types de plasmides soit avec le gène d'intérêt sur exprimé ou pas, à ce gène est couplé la GFP et la mcherry (d'ailleurs je ne sais même pas où l'on place la mcherry) c'est pour ça que je ne vois pas son intérêt.  [...]

Quel test statistique utiliser?

Je voudrais comparer le niveau d'expression d'une protéine entre des cellules transfectées et non transfectées. Pour cela j'ai réalisé un lysat cellulaire et fait migré mes protéines pour détecter ma protéine d'intérêt. J'ai par la suite quantifie l'intensité des bandes.  [...] En règle générale, pour mettre en évidence une différence d'expression par western, on utilise une protéine dont l'expression est connue et dont on sait qu'elle ne changera pas lors d'une transfection.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gène0 AOX1!!

Ce qu'il faut comprendre est plus simple. Le promoteur est inductible par le méthanol. On isole et on clone ce promoteur, on met la séquence codante que l'on veut derrière. Du coup, on crée une protéine dont l'expression est inductible par le méthanol.  [...] En fait, j'ai compris, ce gène AOX c'est un gène qui lorqu'il est induit il permet l'expression de notre protéine dans un pourcentage de 30à 40 % des protéines totales...le promoteur de ce gène est trés fort... et donc l'astuce est de mettre ce promoteur en amont du géne d'interêt.  [...]

[Biologie Cellulaire] Séquence nucléotidique des protéines.

Merci pour la reposes cest bien ce que je supposais. Ça me rassure. Ainsi que pensez vous alors de la citation On raboute a la séquence de nucléotide d'une protéine dite rapporteur. Une enzyme.  [...] L'idée peut être ici de suivre l'expression protéique de la protéine d'intérêt en suivant l'activité de l'enzyme rapportrice.  [...]

Peroxysome

récepteur à d'autres protéines c'est un peu vague. Cette expression peut s'appliquer à tout ce qui est domaine d'interaction protéine/protéine, donc pour des protéines chaperonnes... De là à les appeler récepteur par contre, c'est un peu rapide je pense.  [...] La réponse est oui. chez les eucaryotes les gènes sont morcelés (en mosaïque) avec des introns et des exons, et c'est l'expression différentielle des introns qui va donner plusieurs protéines à partir d'un seul gène.  [...]

[Biologie Moléculaire] Cellules COS

Je voulais savoir si quelqu'un avait des informations sur les propriétés de ces cellules, d'où est-ce qu'elles proviennent (type de tissu, type de cellule), quel type de récepteurs expriment-elles (ceci est lié au type de cellule), quelles sont leurs fonctions dans l'organisme, à quel moment a-t'on décidé de les utilisées pour les transfections (je n'arrive pas à trouver de papier parlant de cette découverte ).   [...] On peut les considérer comme une sorte de cellules minimales, ne conservant que l'expression des gènes nécessaires à sa survie et sa division. Elles sont alors utilisées comme une sorte de sac dans lesquels on peut faire de l'expression de protéines transgéniques, recombinantes ou pas, sans interférence avec le métabolisme cellulaire.  [...]

[Journal club] Extinction de l'expression de gènes par les siRNA : la découverte

Les problèmes de spécificité ne sont pas spécialement recherchés. Ils peuvent exister mais difficile de connaitre leur fréquence étant donné qu'on ne regarde pas, la plupart du temps, si l'expression de protéines autres que celle d'intérêt est affectée. Je pense que les gens travaillant sur des protéines à forte homologie regardent la spécificité de leur siRNA sur les différents homologues, en dehors de ces cas là, certainement peu de personnes le font.  [...] Pour ce qui est de mon cas. je travaille sur deux protéines ayant un fort pourcentage d'homologie puisque ce sont des isotypes. J'ai la chance d'avoir un isotype ubiquitaire et l'autre ayant un profil d'expression tissu-spécifique. Dans les types cellulaires sur lesquels je travaille pour le moment, je n'ai que l'isotype ubiquitaire qui est exprimé, donc que cette forme à éteindre, et je ne regarde pas si je croise avec d'autres protéines.  [...]