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[Biochimie] Dilution en cascade

Je doit réaliser une gamme étalon de la protéine standard BSA (Bovin Serum Albumin) pour doser les protéines de mes échantillons avec la méthode.  [...] Ben dans ce cas là tu prends ta solution solution mère à partir du tube précédent. C'est à dire que tu commences tout d'abord par créer ton tube 5 puis pour faire ton tube 4 tu prélèves dans le tube en l'utilisant comme solution mère puis tu complètes avec du PBS jusqu'à avoir un volume final de 100 uL.   [...]

[Biologie Moléculaire] Resolubilisation des proteines aprés extraction au trizol

Un autre problème peut être que le SDS induit quelques soucis dans les dosages de protéines par la méthode Lowry. Dans certains kits tu as un produit supplémentaire à inclure dans ta réaction si tes échantillons contiennent du SDS, je saurais pas t'en dire plus vu que j'ai toujours utilisé ce genre de kit en suivant bêtement le protocole fourni.  [...] En fait on utilise pour la methode de lowry le kit DC proteine essay de BIO RAD qui comprend 3 reactifs. L'echantillon n'est pas homogène même aprés sonification.  [...]

[Biochimie] (licence/master) Question sur la pcr pour un rapport de stage, merci

Les inconvénients sont une possibilités de contamination en prélèvement les échantillons, une contamination possible pendant la PCR, méthode qui demande de la rigueur et une technicité.  [...] Dans mon stage, on a utilisé la méthode de la PCR multiplex à temps réel. On veut effectué une prévalence sur 471 échantillons de bovins. Utilisation de la PCR-RAPD n'est pas adaptée, car il faut une étude au préalable sure de l'ADN pur des parasites et des différentes races de bovins étudiées pour les différencier ensuite.  [...]

[Biochimie] Expression protéique

La séquence est correcte puisqu'elle a été séquencé et est à 100% identique à l'originale. La protéine vient de Rhodococcus equi et a été cloné dans M. marinum. Ses deux organismes appartiennent au groupe des Nocardia et ont un GC% plus ou moins semblable (65% environ).  [...] Dernière possibilité, si ta protéine est produite à un taux extrêmement faible, il existe des méthodes pour enrichir la concentration des protéines faiblement exprimées dans des échantillons protéïques totaux. Cela permet d'augmenter le signal de ta protéine et de la détecter par Western.  [...]

[Biochimie] Améliorer la quantité, qualité et pureté d'une extraction d'ARN

D'autre part, j'ai mesuré la qualité de l'extraction en mesurant le ration 28S/18S pour chaque méthode utilisé. Pour l'échantillon de précipitation le ratio est 1,39. Pour l'échantillon colonne le ratio est de 1,28. Je remarque qu'il y aune plus grande dégradation dans les échantillons où la méthode par colonne a été fait contrairement aux échantillons fait par la méthode par précipitation.  [...] Je me suis trompé d'image. Voici l'image de la migration des échantillons pour les 2 méthodes Mon coéquipier et moi avons fait les mêmes méthodes donc on a 2 échantillons de chaque méthode. Toutefois, dans les échantillons extrait par colonne sont plus dégradés ce que j'arrive pas à comprendre.  [...]

[Identification] Identification d'une protéine sérique

j'aurai besoin de réponses. Voilà, cette semaine j'ai effectué une migration sur gel de plusieurs échantillons de sérums humains différents. Il s'agit d'électrophorèse SDS PAGE. La migration des protéines sériques se fait donc en fonctions de leurs tailles.  [...] Je te conseille de refaire migrer les échantillons avec le marqueur de poids moléculaires. On peut aussi envisager qu'il s'agisse de protéines non sériques (problèmes de purification), d'éventuels précurseurs ou bien au contraire de produits de dégradation de protéines sériques.  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot "semi-quantitatif", pourquoi??

Il est possible en western blot d'observer des variations de quantité de protéines, mais il faut être prudent pour éviter les biais méthodologiques. par exemple quand j'en faisais, j'utilisais comme référence la quantification d'un de mes échantillons, le même tout au long de la manip, je déposais chaque échantillon en double avec 2 concentrations différentes (ce qui me permettait de vérifier la proportionnalité entre mes 2 dépôts.  [...] C'est contraignant, coûteux (surtout le fait de passer tous les échantillons en double et de perdre 2 puits pour l'échantillon de référence), mais contrairement à Piwi je pense que même si cette méthode reste semi quantitative et ne permet pas de quantifier des modifications mineures, lorsque le phénomène est suffisamment important (de mémoire dans une de mes manip.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gamme et témoin BSA

Afin d'étudier l'activité d'une enzyme, nous commençons par le dosage des protéines présentent dans nos échantillons (je m'explique, notre enzyme est extrait de venin de guêpes, afin de pouvoir avoir la même quantité de protéines dans chacun de nos échantillons on réalise un dosage).  [...] Merci. J'ai vérifié et on utilise bien la BSA comme témoin car elle n'a pas d'activité enzymatique, cela nous permet donc de vérifier que l'activité mesurée est bien du à l'ajout de l'enzyme et non à l'ajout de protéines.  [...]

[Biochimie] Aggrégation des échantillons de SDS-PAGE

Je souhaite mettre en évidence la présence de protéines dans des échantillons de récifs carbonatées. Ce sont des protéines de biominéralisation (processus par lequel les organismes vivants produisent des minéraux pour renforcer leur tissus, ex. coquille). J'ai entre autre réalisé un test BCA qui m'a prouvé la présence de ces protéines (en faible quantité mais présentes).  [...] Je souhaite mettre en évidence la présence de protéines dans des échantillons de récifs carbonatées. Ce sont des protéines de biominéralisation (processus par lequel les organismes vivants produisent des minéraux pour renforcer leur tissus, ex. coquille).  [...]

problème de western blot

j'ai depuis peu un problème dans mes western blot, mes échantillons (protéines extraites de culots cellulaires) migrent en vague alors que mon poids moléculaire est normal. Rien n'a changé par rapport à d'habitude à part les échantillons eux mêmes.  [...] Au moins tu as appris une belle leçon, refaire toutes les solutions quand quelque chose ne fonctionne pas... et surtout ne pas chercher à savoir pourquoi soudainement ça ne marche plus... c'est souvent une perte de temps.   [...]