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FRT GFP mCherry sur deux plasmides différents

Si tes deux protéines intéragissent à un moment donné dans la cellule et que les conditions de FRET sont réunies, tu pourras le détecter, quelle que soit l'ADN source d'où elles proviennent.  [...] d'accord avec Guillaume, il y a deux façons de faire du FRET, soit deux protéines distinctes avec chacune un fluorophore, soit une protéine portant les deux, qui se rapprochent lorsque la protéine change de conformation.  [...]

La microscopie à 2 photons et le mouvement des proteines

La protéine est alors pistée dans les cellules. sa localisation spatio-temporelle peut être déterminée avec précision (à 10 millisecondes et à 1 micron près).  [...] En utilisant la microscopie confocale simple ou a 2 photons, on peut aussi visualiser en temps reels l'interaction de deux proteines dans une cellule au cours d'un evenement biologique (technique de FRET). Ces techniques (FRET, FRAP, FLIP...), ont revolutionne la facon de penser les processus biologiques (et tout ca, essentiellement grace a la caracterisation d'une proteine naturelle fluorescente extraite d'une meduse, la GFP).  [...]

[Biologie Cellulaire] Définitions compliquées

J'ai un travail de biologie à remettre pour mercredi sur la mitose, le sujet m'intéresse, mais je suis loin d'être un expert en biologie, en fait, j'ai un problème assez gros avec les définitions des constituants de la cellules, je ne comprends pas celles du dictionnaire.  [...] Le centriole. C'est une structure normalement très proche du noyau et permet l'accrochage des microtubules (MT), il est alors appelé MTOC (microtubul organizer center). Il est entouré de matière amorphe dans laquelle se trouvent diverses protéines (comme la tubuline gamma) qui permet l'ancrage des MT.  [...]

Technique du Double Hybride

D'une part tu surexprimes des proteines fusions qui peuvent modifier les proprietes des proteines d'interet et tu forces des proteines a se rencontrer dans un meme compartiment cellulaire sans savoir (c'est aussi l'interet de la technique) si elles peuvent reellement se rencontrer dans une cellule.  [...] Il faut que la banque que tu cribles soit representative, cela implique l'analyse de milliers de clones (selon la taille du genome), ensuite si tu cherches par expl a etudier les interactions avec des proteines membranaires la tu est mal, car dans le systeme 2H les proteines sont ciblées dans le noyau (comme l'indiquait igothigh), or une proteine membranaire surexprimée dans le noyau ca risque de s'agreger de de tuer ta cellule.  [...]

FRET rapport GFP/mCherry

j'ai une petite question... je ne comprends pas ce que signifie le rapport entre deux fluorophores comme la GFP et la mCherry.. Pourquoi ne pas mesurer l'intensité de la GF seule.   [...] parce que ça ne renseigne pas sur la proximité entre deux protéines, ce que fait le FRET. http.//fr.wikipedia.org/wiki/Transfe..._fluorescentes.  [...]

[biologie moleculaire] GFP red-shift

Quel est l'intérêt à utiliser des variantes de GFP dont le spectre d'exitation a été décalé vers le rouge. Est-ce que àa a quelque chose à voir avec le fait que l'on puisse utiliser simultanéement le DsRED et la GFP.   [...] Dans le même ordre d`idée on trouve le fameux couple CFP-YFP qui à la propriété de faire du FRET. Cette technique est tres utile pour la colocalisation de deux protéines.  [...]

[Biologie Cellulaire] Colocalisation des protéines

Concrètement, c'est de l'immunofluorescence sur plusieurs protéines en même temps. Et plus particulièrement sur des protéines qui interagissent entre elles in-vivo.  [...] Même en utilisant le meilleur microscope, la volume d'un pixel correspond généralement à plusieurs nm3 (une vingtaine de nl pour un pixel de taille 0.2*0.2*0.5µm). Et on peut en mettre un paquet de protéines différentes dans cet espace. Un des seuls moyen vraiment sur en microscopie pour vérifier l'interaction entre deux protéines est le FRET (qui est également détaillé dans le document de Htu).  [...]

[Biotechnologie] Pourquoi utiliser un FRET pour la détection d'une protéine

Donne un peu plus de précision. Le FRET est utilisé pour déterminer la présence d'un fluorophore à proximité d'une autre fluorophore. Est-ce que ta protéine entre en interaction avec une autre protéine sur laquelle tu as mis ton autre fluorophore est-ce que ta protéine va être clivée entre tes deux fluorophores est-ce que tu t'intéresse au repliement spécifique d'une protéine Tout ceci sont des exemples qui sont principalement investigué à l'aide de FRET.  [...] Dans ton cas, si par exemple on veut le moment où deux protéines sont liées, le FRET peut nous permettre de le voir, voir même de quantifier ces couples.  [...]

[Biologie Moléculaire] Marquage fluorescent d'une protéine

Je cherche a réaliser une expérience en FRET pour observer les changements conformationnels qui se produisent dans ma protéine. Pour cela j'ai besoin de la marquer spécifiquement. Je sais que je peux le faire par l'intermédiaire des résidus cystéines, j'ai donc retiré toutes les cys de ma protéine, pour n'en remettre qu'une la ou je le souhaite.  [...] Meme si c'est pas ce que tu as demande, il y a aussi l'option de certaines proteines fluorescente qui sont bien mise au point pour le FRET ( ici par exemple).  [...]

Institut Jacques Monod

Etant à P7, j'ai eu l'occasion de faire plusieurs visites à l'IJM. Comme évoqué précédemment, tout dépend du laboratoire. Il y a cependant pluseurs plateformes extrêmement performante, comme celles d'imagerie cellulaire (du FRET aux petits oignons, imagerie sur cellule vivante tout ça) avec des microscopes très récents (plusieurs confocaux mono et multiphotons, microscope 5-D, épifluorescence.  [...] ..), celle de spéctrométrie de masse (pratique pour faire des identifications de nouvelles protéines.), ou encore celle de cytométrie. Ils disposent également d'un BIACORE qui permet de faire des mesures d'affinités entre macromolécules plus précises tu meurs, technologie qui ne court pas les labo même les plus thunés.  [...]