• Forum - Protéine, Vecteur, Clonage

ubiquitine et protéasome

Je t explique la manip. Enfait je suis entrain de créer le vecteur de clonage permettant de surexprimer la protéine permettant de capter une autre pour l'envoyer au protéasome. Est ce que tes inhibiteurs peuvent s utiliser sur des cellules S2+ Est ce que tu penses que si je transfecte ce vecteur dans ces cellules en presence d'inhibiteur et que je marque ma prot soit disant dégradée je pourrais par cette methode confirmer ou pas sa dégradation.  [...] Je t explique la manip. Enfait je suis entrain de créer le vecteur de clonage permettant de surexprimer la protéine permettant de capter une autre pour l'envoyer au protéasome. Est ce que tes inhibiteurs peuvent s utiliser sur des cellules S2+.  [...]

[Biologie Moléculaire] vecteur de clonage et le vecteur d'expression

svp quelle est la difference entre le vecteur de clonage et le vecteur d'expression à part que l'un a un promoteur et pas l'autre.  [...] Un vecteur d'expression est un vecteur dans lequel on va cloner le même fragment d'ADN après vérification du clonage dans le vecteur de clonage (taille de l'insert, séquence...) et grâce à son promoteur (constitutif ou inductible) ce vecteur va diriger la bactérie hôte d'expression pour produire la protéine d'intérêt.  [...]

[Génétique] Obtention de sonde plasmide

Le prof nous demande de simuler l'insertion dans un vecteur de clonage d'une sonde à partir de l'ARNm de la protéine.  [...] 2) Je ne trouve aucun enzyme de restriction qui corresponde entre mon ARNm et les différents vecteur de clonage disponible sur le marché. Comment faire Selon mon prof c'est très simple (pour lui tout est simple) il suffit juste de choisir un plasmide et deux enzymes de restriction au pif, et de rajouter les nucleotides correspondant aux 2 bout de ma sonde. Comment je fais ca moi.  [...]

Traduction de termes anglais issus d'un article.

Pour FLAG c'est aussi ce que j'aurais dit à la base, mais dans l'article avec un petit Ctrl+F toutes les apparitions de FLAG se font quand ils nomment le vecteur (pCMV-FLAG), je l'ai pas retrouvé en dehors du vecteur, pour designer la protéine, donc pas sur que dans le contexte ca soit ca, si (pas lu l'article en entier).  [...] si c'est ca. En fait il existe des vecteurs ou le tag (flag, 6his, myc, ou autre) est déjà là, en amont ou aval du site de clonage, du coup en intégrant ton cDNA en phase dans ce vecteur tu peux directement produire une protéine de fusion. Pratique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

..) ainsi que leur force, la présence d'étiquette peptidique ou protéique (qui permettent de faire de la purification protéique). Voilà pour les caractéristiques générales d'un vecteur. Selon les différentes caractéristiques tu auras donc des plasmides dits d'expression, d'autres de clonage.  [...] On trouve derrière la cassette de clonage pour insérer votre protéine d'intérêt. C'est donc un vecteur de choix pour la production (il porte un promoteur de transcription) et la purification (un tag excisable) des protéines.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage orienté, design d'amorces

Pour le sous-clonage, c'est juste que j'ai envie de gagner du temps. Si je peux directement passer mon produit d'amplification dans mon vecteur d'expression, ça me fait gagner 2/3 jours ^^. Donc je cherche à savoir si c'est possible et si oui comment (précaution à prendre, etc.  [...] ..). Car le sous-clonage (vecteur de propagation ) permet d'avoir une grosse quantité de son insert, propre, et avec les extrémités adéquates pour ensuite refaire un clonage mais dans le vecteur d'expression de la future protéine recombinante.  [...]

[Biologie Moléculaire] pcr/clonage

Est ce qu'on fait la PCR apres avoir inseré les fragments d'intérets dans les vecteurs,ou est ce qu'on amplifie par PCR les fragments d'intérets qu'on insere ensuite dans le vecteurPour moi la PCR est une technique de clonage,donc si on connait la séquence qu'on veut cloner,une PCR est suffisante,il n'y a pas besoin d'utiliser de vecteurs apres.  [...] La PCR va permettre d'isoler et amplifier un fragment d'intérêt qui va ensuite être intégré dans un vecteur. Lorsqu'on fait un clonage ou un sous-clonage, on souhaite exprimer ce fragment qui dans la plupart des cas correspond à l'ADNc codant une protéine ou une partie de la protéine.  [...]

[Biologie Moléculaire] m-x!

bonjour, j'ai une question concernant l'ecriture, par exemple quand on veux cloner un gene d'une proteine x dans un vecteur de clonage, l'ecriture de ce gene est la suivante. m-x. le m est fé reference à quoi merci d'avance.  [...] en fait c'etais le clonage de EBI3 (sous-unité d'une interleukine) et aussi d'autre genes et dans la boite ou les colonies poussent après la transformation s'est ecri m-EBI3 pareil pour les autres genes.  [...]

[Biotechnologie] vecteur de clonage et vecteur d'expression

CA peut être plus ou moins similaire, a part que le vecteur de clonage est fait pour être réplicable en bactéries (comme une sorte de vecteur navette ou on insère ce que l'on veut pour l'amplifier, c'est a dire qu'il contient des origines de réplication, des sites de clonages, etc), tandis que le vecteur d'expression est lui équipé des éléments nécessaires a l'expression de ta séquence, que ce soit expression procaryote ou eucaryote.  [...] donc si j'ai bien compris, le vecteur de clonage s'utilise in vitro alors que le vecteur d'expression est inséré dans une bactérie pour exprimer le gène d'intérêt.  [...]

[Biochimie] Etude des partenaires protéiques : Co-Immunoprécipitation, Tap-Tag et double hybride

pour créer une protéine de fusion, il te faut les cDNA des deux protéines. Tu les insere dans un vecteur à la suite, en prenant soin de les mettre en phase et en supprimant le codon stop de la premiere, comme ça tout est traduit en une fois. A ma conaissance on fait du double hybride chez la levure puisque ca n'est pas un procaryote.  [...] Et le vecteur utilisé pour le clonage, de quoi s'agit-il Plasmide, cosmide, YAC Et comment ce vecteur s'exprime chez la levure Le gène rapporteur, il se situe où Il faut forcément que l'organisme qui exprime les protéines fusions soit un eucaryotes.  [...]