• Forum - Protéine, Solution, Concentration

[Biologie Moléculaire] Immunocyto - Comment améliorer la fixation ?

J'ai un petit soucis avec mes immunocytos. Mes cellules ont tendance à se décoler au cours de la manip en dépis de tous mes efforts et de toute ma délicatesse pour appliquer les différentes solutions.  [...] Je pensais allonger le temps de fixation ou la concentration de la solution de fixation mais j'ai peur que l'anticorps ne reconnaisse plus correctement ma protéine.  [...]

[Biochimie] cristallographie

Comme la goutte est faite d'un mélange de la solution de protéine et du réservoir, la concentration en agent précipitant y est donc plus faible. Aussi, de l'eau va s'évaporer de la goutte jusqu'à ce que la concentration en agent précipitant dans la goutte soit égale à celle du réservoir.  [...] La goutte va donc progressivement se concentrer, la protéine va franchir sa limite de solubilité et va précipiter, idéalement de manière ordonnée sous la forme d'un cristal.  [...]

[Biochimie] méthode etude macromolécules

On ne peut pas discriminer des protéines en mesurant l'absorbance à 280nm. La seule information qu'on peut en tirer, c'est la présence ou non de protéines contenant des AA aromatiques dans la solution. On peut éventuellement déterminer la concentration d'une solution contenant une seule protéine si on connaît le coefficient d'absorption de celle-ci.  [...] Pendant ma thèse, j'ai exprimé et purifié une protéine avec une forte affinité pour les ARN, donc des acides nucléiques. En début de manip, le pic d'absorption de mon échantillon se situait à 260 nm, ce qui correspond aux AN. Après 2 colonnes si je me souviens bien (une première Ni-NTA pour isoler ma protéine avec un tag histidine) puis une deuxième selon la charge, UnoQ il me semble, bref, mon pic se situait à 280 nm, ce qui témoignait de l'élimination des AN puisque ce pic d'absorption correspond aux protéines (260 VS 280 nm).  [...]

[Biochimie] solubilité des protéines

A basse concentration saline (salting in), les régions chargées des protéines en solution s'attirent ==. agrégation via les régions hydrophiles ==. basse solubilité.  [...] A concentration saline intermédiaire, les ions en solution vont casser les interactions entre régions hydrophiles de la protéine ==. la solubilité augmente.  [...]

Osmose et diffusion...

Bonjour à tous, je suis à la recherche de quelqun qui pourrai me dire pourquoi nous observons un phénomène de plasmolyse cher une hématie plongée dans une solution à 0,62 osmol/L, alors que le NaCl se dissocie et pourrait donc par transport passif à travers une protéine, équilibrer les concentration des deux milieux par simple diffusion, ce qui empècherai le phénomène d'osmose, et donc de plasmolyse.  [...] Après, (il s'agit d'une hypothèse que je pense juste mais mes cours de physio des fluides sont loins...) je pense que la présence de chlore et de sodium intracellulaire empeche l'entrée de nouveau ions (un equilibre osmotique ET ionique doit etre respecté entre le compartiment intra et extracellulaire).   [...]

spectrophotométrie

Donc, si tu sais que ton échantillon est de la protéine pure, et que tu a le coeficient d'absorption des protéines à 280nm tu en déduis la concentration de ton échantillon en protéines (enfin, l'ordinateur la calcule pour toi, en l'occurence).  [...] Attention si tu as dans ton échantillon des produits qui absorbent aussi la lumière à 280 nm ta mesure en sera faussée, tu sur-estimera la concentration, car le spectrophotomètre ne différencie pas les produits entre eux, c'est juste une mesure globale.  [...]

précipitation des protéines

en fait la précipitation des protéines arrive lorsqu'il y a une faible solubilité de la protéine dans la solution. En concentration faible de sels dissouts dans la solution, (donc faible force ionique) les sels interagissent avec les radicaux des protéines et aident à leur dissolution, or qu'en forte concentration saline, tout change, en effet, il n'y a plus assez de éluant (pris par les sels) donc les protéines se regroupent, on dit qu'elles précipitent (relargage).  [...] ceci dit, la concentration en sel qui mène à la précipitation d'une certaine protéine n'est pas forcement la même pour une autre.  [...]

[Biochimie] proteine

plus la concentration saline d'une solution contenant une proteine est elevée et plus l'activité de cette proteine est importante. vrai ou faux.  [...] Chez les bactéries halophiles au contraire de grandes concentrations en sel sont nécessaires pour maintenir les conformations protéiques.  [...]

[Biochimie] Coloration/Protéine/Concentration

L'absorbance du tube B est deux fois plus élevée que le tube A. Ai-je le droit de dire que la concentration de la protéine B en g.L -1 est deux fois plus élevée que la concentration de la protéine A sachant que les deux protéines sont différentes.  [...] Non parce que si je me souviens bien de cette technique, l'intensité de la coloration dépend de la concentration de la proteine et de sa taille (l'intensité de la coloration dépend du nombre de liens peptidique dans la solution exactement).  [...]

dégradation de protéine recombinante

Quelque chose de possible aussi, c'est qu'une bonne partie des produits de dégradation soient instables en solution et qu'ils aient tendance à s'aggréger. Dans ce cas, si tu as accès à une ultracentrifugeuse, tu déposes ta protéine sur un coussin de sucrose 20%, tu centrifuges 1 heures à 100000 g, ta protéine reste au-dessus et les contaminants aggrégés vont traverser le coussin.  [...] Que tu fasses une gel-filtration ou une echangeuse d'anion (surtout dans le deuxième cas en fait), la premiere chose à faire en sortie de colonne de nickel est de dialyser (eventuellement par concentration/redilution) ta protéine contre une solution contenant très peu de sel.  [...]