• Forum - Protéine, Promoteur, Plasmide

[Biologie Moléculaire] Exprimer une protéine fonctionnelle en plasmide

Mais seul le cDNA suffit à exprimer la protéine nan En considérant biensur que le promoteur soit déjà dans le plasmide Parce que en fait je ne comprends pas bien l'histoire de l'intron avant l'ATG.  [...] Il ne veut pas l'exprimer dans une bactérie puisqu'il précise qu'il clone son gene sous control du promoteur CMV qui est un promoteur viral eucaryote.  [...]

[Biologie Moléculaire] différence entre 2 plasmides

Un plasmide d'expression est un plasmide qui une fois entré dans la cellule permet de produire une protéine alors qu'un plasmide reporter est une construction qui va permettre de reporter l'activité de la protéine synthétisée par le plasmide d'expression. Il s'agit le plus souvent d'un promoteur qui répond à la protéine produite qui est donc un facteur de transcription.  [...] Si la protéine se fixe sur le promoteur elle va induire la transcription et la traduction d'une protéine rapporteur le plus souvent la luciférase qui émet de la lumière. L'activité de la protéine testée va donc être rapportée par la quantité de lumière émise.  [...]

[Biologie Moléculaire] Immunodétection après production d'une protéine recombinante

Lors d un TP nous avons transformé une souche E coli (rosetta) avec un plasmide recombinant afin de produire et purifier une proteine d interet. L expression du gene de cette proteine est sous la dependance du promoteur T7, et necessite ainsi l arn pol T7.  [...] Oui j ai fait un mauvais raccourci, je voulais dire que le gene etant apporté par un plasmide, il y en a donc plusieurs copies dans E Coli et une production plus importante de proteine lysozyme.  [...]

[Microbiologie] Stabilisation d'un plasmide chez la levure

J'ai reçu un mutant ne pouvant pas pousser en absence d'uracile (donc auxotrophe pour l'uracile)et possédant un plasmide permettant d'exprimer une protéine (Hsp104) dont le gène est sous la tutelle d'un promoteur induit par l'oestradiol. Ce plasmide contient le gène URA 3+ permettant la croissance en absence d'uracile.  [...] Si c'est pour faire une extraction de plasmide derriere, je ne pense pas que ca pose de probleme. Maintenant si tu veux étudier la physiologie ou faire un crible en utilisant des cellules restées a 4°c la je le déconseillerai.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide

En plus y a des petites ORF dans les extrémités, on pense que ça code pour la protéine qui a été montrée comme fixée en 5' du plasmide. Elle permettrait d'initier la réplication, mais rien n'est montré.  [...] imaginons que je veuille étudier une protéine tagguée ou un promoteur a l'aide d'un gène reporteur, dois-je obligatoirement utiliser un plasmide pr transfecter ma cellule par lipofection ou biolistique.  [...]

Protéine de fusion recombinante dimérique, besoin d'aide.

- Pour faire une protéine de fusion, est ce qu'il faut mettre le gène codant pour la protéine d'intérêt et celui pour le gène que l'on souhaite fusionner avec celle-ci (par exemple la poly histidine) sur le même plasmide sans les séparer d'un promoteur ou est ce qu'il faut rajouter quelque chose en plus.  [...] C'est un vecteur d'expression pour la proinsuline et l'écotine. Et dans l'énoncé, il est noté que l'écotine est une protéine dimérique. Du coup, je pensais qu'il fallait faire deux plasmides. Un avec la proinsuline et l'écotine et un autre juste avec l'écotine.  [...]

[Biologie Cellulaire] CSM et pcdan 3

Je commence un nouveau stage depuis peu et le labo travaille sur des cellules souches mésenchymateuses. Une manip consiste à les transfecter stablement avec le plasmide pcdna3 ou pcdna3.1 afin d'exprimer stablement une protéine (donc sous contrôle du promoteur fort CMV).  [...] Le soucis est qu'ils ont pu remarqué depuis quelque temps l'expression du gène tend à diminuer au bout d'un moment, et que donc l'expression constitutive ne l'est plus tant que ça.   [...]

Problème de rendement kit Maxiprep

Tu as dit que tu utilisais une souche d'expression, pour peu que ton gène possède tout son CDS et qu'il y a un promoteur dans le plasmide, si la bactérie l'exprime correctement il se peut que cette protéine ait un effet,  [...] bien souvent quand ca arrive, on observe plutot un auto-empoisonnement et donc elles ne se reproduisent pas, donc vu que tes bactéries se développent il n'ya pas auto-empoisonnement, mais on sait jamais, si c'est une protéine qui joue sur la régulation des plasmides ou sur les séquences génétiques (sans toucher au chromosome et donc a la viabilité) peut etre que ta protéine est la cause.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification et purification de plasmide

Pour ce qui est de la GFP je me disais juste que si mes bactéries sont vertes c'est qu'elles ont bien intégré le plasmide mais vu qu'elles poussent en présence d'antibio c'est que c'est bon. Comme elles ne sont pas vertes je pense que c'est juste qu'il n'y a pas de promoteur procaryote pour la GFP dans mon plasmide.  [...] Il n'y a pas de promoteur procaryote devant la GFP sur ce vecteur. Ceci dit, le gène KanR est dans la même orientation que le gène GFP et il est possible que la GFP s'exprime à partir d'un polycistron. La réponse est donc. il faut essayer pour le savoir.  [...]

Probleme d'induction de GST dans bacterie

Enfin a en croire la carte plasmidique, votre protéine serait sous le contrôle d'un promoteur tac je vous conseil cette littérature,. http.//www.sciencedirect.com/science...78111988904404 vous y trouverez des éléments de réponse.  [...] J'avais eu le même probléme l'année derniére, en plus moi je faisais des litres de culture, je ne te raconte pas la galére. Pour moi c'était. BL21 Star(DE3), plasmide pGEX-2T avec fusion GST-toxine bactérienne, promoteur tac et induction á l'IPTG. Finalement la solution dans mon cas pour avoir une assez bonne quantité de protéines recombinantes, était d'induire á une DO tardive de 1.  [...]