• Forum - Protéine, Nucléaire, Anticorps, Fluorescent

[Biologie Cellulaire] Immunofluorescence

pour mettre en évidence une protéine qui s'exprime à la fois dans le noyau et le cytoplasme, on doit utiliser en même temps des anticorps fluorescents et des intercalants de bases.  [...] oui mais si ma protéine est nucléaire mes anticorps fluorescent ne vont pas passer dans le noyau donc comment dois-je faire pour mettre en évidence cette protéine dans le noyau.  [...]

Immunomarquage de la rétine du macaque

puis on utilise un anticorps polyclonal anti la protéine d'interet, on rince et on met l'anticorps secondaire anti- anticorps de lapin, marqué par un marqueur fluorescent, dilué dans du PBS contenant 1% d'albumine de sérum bovin pendant 1h à température ambiante.  [...] Bref, ces étapes de saturation permettent de s'assurer que les sites non spécifiques sur la lamelle ne vont pas être détectés par notre anticorps (cela serai ennuyeux). On les recouvre donc avec une protéine bidon, l'albumine contenu dans le sérum.  [...]

[Immunologie] Immuno-marquage

Donc on va profiter de cette affinité pour marquer des protéines cibles. Mais pour qu'on puisse voir, on fixe sur les anticorps des marqueurs. Alors ça peut être un marqueur radioactif par exemple, ou un marqueur fluorescent comme ça au microscope on repère bien la protéine cible.  [...] Mais faut savoir que chaque plasmocyte ne sécrète qu'un seul type d'anticorps. On choisira qu'un seul plasmocyte et on va en faire un hybridome( en gros. hybridation entre une cellule cancéreuse et un plasmocyte). Pourquoi on fait ça Tout simplement pour rendre le plasmocyte immortel car dans le corps le plasmocyte a une durée de vie très courte(de l'ordre du dixaine de jours si je me rappelle bien mais on s'en fou en fait ) Et donc voilà on a donc une jolie culture de plasmocytes qui sécrètent tous des anticorps contre la protéine qu'on veut observer.  [...]

[Biologie Cellulaire] Cytométrie en flux

Bonjour tout le monde, petite question technique...je voudrais regarder la différence d'expression d'une protéine par cytométrie en flux dans 2 populations différentes une de lymphocytes T sains et l'autre de lymphome, comment je peux faire pour marquer les populations sachant qu'il n'y a pas a ma connaissance de marqueur spécifique sur les lymphocytes tumoraux est ce que je peux marquer une population AVANT avec un anticorps fluorescent par exemple anti CD4 ou CD8, mais apres quand les é populations vont être mélangées est ce que l'anticorps va tenir et va pas se décrocher pour aller sur les autres qui expriment aussi le CD4ou8 merci de m'aider.  [...] super cette explication me va, je vais les fixer enfin fictivement... mon concours est cette après midi donc je ne vous embeterais plus avec toutes mes questions tordues...jusqu'au prochain concours...lol. et merci encore pour votre aide.   [...]

immunofluorescence

les 3 techniques sont bien utilisées toutes les 3 en elisa. celle en sandwich consiste a coaté une plaque avec un anticorps. ensuite tu rajoute ton antigène qui va se fixer a ton anticorps. tu rajoute ensuite un autre anticorps marqué avec un marqueur fluorescent qui va se fixer sur un autre épitope de ton antigène. tu n'as plus qu'à lire les résultats.  [...] En sandwich peut également être pour faire de l'immunolocation avec un anticorps fluorescent couplé a le GFP en N-terminal et DsRED en C-terminal par exemple... le tout pour étudier une protéine qui subit un clivage, exemple. la nucléoline... et ainsi suivre dans quel partie de la cellule elle est clivée (Noyau, nucleole, mitochondire ou autre.  [...]

Immunologique: test du type ELISA

Imaginons que je cherche la protéine X. Et bien, je vais devoir utiliser un antigène Ya qui détecte la protéine X et c'est seulement par la suite que je mets un 2e antigène (disons Yb ) qui possède une molécule fluorescente pour qu'il se fixe sur l'antigène Ya.  [...] Si tu mélanges un cocktail de protéines et un anticorps fluorescent, qu'ils s'accrochent ou pas tu verras la fluorescence.  [...]

[Biotechnologie] cytométrie de flux/épifluorescence

la cytometrie de flux est une technique qui permet de détecter la taille, la granulosité d'une cellule ainsi que la fluorescence de protéines cellulaires (protéines fluorescentes comme la GFP ou marquées avec un anticorps couplé à un fluorochrome) ou de l'ADN (ex intercalant fluorescent de l'ADN).  [...] Un microscope à épifluorescence est un microscope muni de faisseaux laser, qui permet l'observation d'échantillons tels que des cellules possédant des protéines fluorescentes comme la GFP ou marquées avec un anticorps couplé à un fluorochrome.  [...]

Conservation des anticorps précédent immunofluorescence

J'utilise des anticorps pour reconnaitre certains compartiments endosomal de macrophages. J'effectue un double marquage en utilisant ces anticorps dans un premier temps puis des anticorps fluorescent par la suite.  [...] Oui, les anticorps supportent très mal les cycle congélation-décongélation. on a pour coutume de les aliquoter pour ne les décongeler qu'une fois et de garder une faible quantité à 4°C, car la qualité de l'anticorps va bien finir par chuter (mais on peut souvent les garder 1-2 mois à 4°C).  [...]

[Biologie Cellulaire] immunofluorescence ???

Ce que j'ai pu comprendre, c'est qu'on utilise le gène ou la protéine ciblée et on forme un anticorps contre celui-ci... mais ce qui émet la fluorescence, le fluorochrome, comment est-ce qu'il est incorporé.  [...] Concernant l'immunofluorescence tu trouves ça très facilement sur le net... Tu utilises un anticorps reconnaissant spécifiquement ta protéine d'intérêt (même si en pratique c'est pas toujours aussi simple et spécifique et que ça nécessite beaucoup de mises au point).  [...]

[Biologie Cellulaire] La cellule mystère.... - Page 30

En vert, cela est localisé à la surface du noyau (si c'en est un), de taille conséquente, provoquant une légère protrusion, et de structure conique (panier de basket) ce qui me fait penser à un pore nucléaire...Cependant ce qui me fait revoir cette supposition à la baisse c'est son importante grosseur par rapport au noyau et la présence d'une seule structure de ce type.  [...] Donc en résumé, c'est bien dans le noyau, c'est bien une faible intensité de fluorescence en bleu, la protéine est donc présente dans des zones très ciblées du noyau et +/- absentes dans les autres zones.  [...]