• Forum - Protéine, Extraction, Cellules

[Biologie Cellulaire] Etudier l'expression d'une protéine entre différentes cellules.

De plus, quelqu'un sait-il comment on peut appréhender la sécrétion et mise en place d'une matrice extracellulaire par notre culture cellulaire.  [...] pour cela tu mets les cellules en culture puis à un certain temps tu prélève les cellules et tu fait l'extraction de la protéine et purification. lorsque tu fait le westerne blot tu révélera avec des anti-corps diriger contre la protéine d'intérer. sinon tu peux faire aussi un marquage de la protéine avec des acides aminées radioactive en utilisant la technique de pulse chasse.  [...]

[Biochimie] Comment désagréger des protéines recombinantes?

[Biochimie] Comment désagréger des protéines recombinantes.  [...] Comment désagréger des protéines recombinantes La protéine est produite dans E.coli puis je procède à une extraction protéique, une purification IMAC et un dessalage. Enfin, je la filtre à 0.2um avant de la tester sur cellules mais la protéine d'intêret forme des agrégats après quelques jours de conservations à 4°C ce qui m'oblige à relancer des campagnes de production.  [...]

[Biochimie] Casser des aggrégats

Je travail sur des cellules eucaryotes, après avoir fait une extraction protéique, j'ai dénaturé certains de mes échantillons à 95°C, le souci est que j'ai inversé les tubes et la protéine que je veux voir forme des aggrégats lorsqu'on la dénature à 95°C.  [...] Tu dis que la protéine que tu veux voir forme des aggrégats mais cela dans des extraits cellulaires. A moins que des aggrégats ne se forment que dans des extraits de cellules surexprimant ta protéine et pas dans des extraits ne la surexprimant pas, tu ne peux pas dire que ces aggrégats sont ta protéine.  [...]

Vaccin hépatite B - Page 4

vous dites que le vaccin ne comporte aucune trace de virus mais comment peut on etre sur a 100% que les cellules ovariennes de hamster chinois(CHO) sur lesquels sont clonés l'antigène de certains vaccins, sont exempt de tout virus meme aprés extraction et purification de la protéine.  [...] 3- Purification de la protéine, éliminant toute trace de cellules productrices, de virus, de produits de dégradation de la protéine, de milieux de culture.  [...]

[Biologie Moléculaire] kinase

C'est une proteine faiblement exprimee dans la cellule, donc difficile a purifier pour faire de la spectro de masse, et j'ai quelques resultats qui indiqueraient que la surexpression de la proteine sature le systeme de phosphorylation (donc impossible a utiliser pour purifier de grosses quantites).  [...] D'une maniere generale, lorsque tu cherches a montrer une phosphorylation, tu utilises des anti-phosphatases dans ton tampon d'extraction de la proteine ou de lyse des cellules. Rien ne t'empeche de l'utiliser dans ton lysat de reticulocyte. Celui utilise est souvent l'orthovanadate de sodium, tres efficace et spectre tres large.  [...]

[Biologie Cellulaire] extraction protéique (ERK1/2) à partir de cellules U2OS

Merci c'est très gentil et ta réponse était rapide, effectivement j'ai utilisé une résine talon mais j'ai pas pu avoir cette protéine en blot sachant que je l'ai pas encore eluer.  [...] j'ai une autre question differente je voulais peter un culot de cellules cultivées dans des boites 35mm j'utilise le grattage dans du PBS 1X la kestion à combien je centrifuge pour avoir un bon cult sachant que la derniere fois javais presque rien de materiel lors du dosage lowry.  [...]

[Biologie Cellulaire] Western blot + extraction proteine

Alors voila, je cultive des fibroblastes cutanés en flask de 75cm2 sur lequel j'aimerais faire une extraction de proteines totales pour ensuite faire un WB pour pouvoir detecter ma prot d'intêret.  [...] Attention attention, le RIPA est un buffer principallement utilisé pour faire des IP. Si ce sont les protéines totales qui vous intéressent ce n'est pas une extraction en tant que telle qu'il faut faire, il vaut mieux lyser classiquement vos cellules dans du Laemli 1X avec béta-mercapto ou DTT.  [...]

[Biochimie] Extraction protéine cry du bacillus thuringiensis

J'ai une présentation à réaliser sur l'extraction de la protéine cry (insecticide) du bacillus thuringiensis. Uniquement l'extraction et non la culture et la purification. Le problème est qu'il existe énormément de méthodes liées à l'extraction de cette protéine, et je m'y perd donc un peu.  [...] La méthode que je choisirais pour une telle isolation serait une destruction physique (Homogénéisateur de type Dounce, presse Aminco- French...) suivie d'une sédimentation pour séparer les composants. Ces méthodes conviennent-elles à mon problème De plus, avez vous une idée du tampon à utiliser pour réaliser cette extraction (SDS ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction de l'ADN de cellules eucaryotes, lyse

j'ai vu que l'on pouvait utiliser de l'urée, du SDS, de l'EDTA, du NaCl et de la protéinase K... il faut tous ces produits pour lyser la cellule ou seulement une partie et dans ce cas là lesquels sont nécessaires.  [...] dans l'exemple de cellules issues de l'épithélium de la bouche par exemple, quel traitement feriez-vous subir à votre échantillon pour extraire l'ADN.  [...]

[Biologie Cellulaire] Extraction de protéine du coeur

Pour l'extraction je ne sais pas (je n'ai jamais travaillé sur le coeur de rat) mais en ce qui concerne le protocole BCA je peux te l'envoyer en PDF.  [...] Je voudrais dans un premier temps passer un lysat total sur un gel d'electrophorèse puis dans un deuxième temps m'intéresseer à une protéine puis à une autre en fonction de ce que je vais trouver.  [...]