• Forum - Protéine, Dégradation, Tag

[Biochimie] Dégradation tag et protéase

J'aimerais savoir s'il existait un couple degradation tag/protéase spécifique utilisé pas mal chez E.coli par exemple. Il faudrait que la protéase ne dégrade aucune protéine de l'organisme, sauf celle marquée par le degradation tag.  [...] Je voudrais produire dans une bactérie ou une levure une protéine contenant un dégradation tag d'une part, et d'autre part une protéase (par exemple sous le contrôle du promoteur Xgal) qui permettrait de la dégrader, et ce avec le minimum d'interférences par rapports aux autres protéines de la bactérie/levure.  [...]

[Biologie Moléculaire] Protéine étiquetée

C'est une protéine où on va lui coller une séquence Tag (exemple, l'histidine) et ça permet de savoir quel dose de protéines exogènes tu utilise dans ta culture cellulaire.  [...] Le tag est une séquence d'acides aminés rajoutés en amont ou en aval de ta protéine et permet de la visualiser (tags fluos) ou de la purifier (his tag, gst tag...).  [...]

Un prob a resoudre

Chez les eucaryotes, ces ARNm sont degrades rapidement dans le noyau. Chez les procaryotes il y a un tag ajoute aux proteines en cours de synthese provenant d'un tel ARN qui provoque leur degradation.  [...] Mais pourquoi alors l'arn messager ne renferme pas les 2 codons stop et intiateur el le modele du fragement de l'adn codant pour cette meme proteine doit les contenir.  [...]

[Biochimie] Séquence Kozak

Je vais donc en mettre une aussi devant la séquence codant pour le tag.Ma question. est-ce qu'il faut supprimer la séquence Kozak devant l'atg de la protéine pour ne plus avoir que celui en tête du tag ou cela n'a-t-il pas d'importance.  [...] D'un point de vue moléculaire, que se passe-t-il quand on une séquence Kozak devant chaque atg quid de la protéine fusion du tag.  [...]

Créer une protéine taguée NLS

Ma question est. comment lui ajouter très simplement un tag NLS pour avoir une protéine constitutivement nucléaire.  [...] Quelqu'un connait-il un vecteur avec un tag NLS dans lequel je pourrai rentrer la séquence codant ma protéine Puis-je acheter directement le TAG.  [...]

[Biochimie] Les Tag en biologie moléculaire

L'idée c'est d'accrocher à ta protéine recombinante quelques chose d'utile. ça peut être une séquence qui va coder pour de la fluorescence (détection de ta protéine recombinante dans la cellule par ex), pour un affinity tag (qui va te permettre par exemple d'isoler ta protéine recombinante par une chromato d'affinité), une séquence en Cys-Cys-Pro-Gly-Cys-Cys, qui permettra l'utilisation de FLAsH ou REAsH, un tag qui va modifier la solubilité de ta protéine, un His tag (tag constitué de plusieurs histidines),  [...] Le tag histidine qui est enfaite un tag polyhistidine (6 his consécutifs) interagit fortement avec les ions. Dans la chromatographie par affinité des ions sont fixés sur la résine, lorsque la protéine possédant le tag His passera par là elle se fixera aux ions. Cela te permettra d'isoler la protéine.  [...]

[Biochimie] L'activité d'une protéine

je suis entrain d'étudier un article scientifique dans lequel ils expliquent comment ils détermine l'activité d'une protéine. Ici on determine l'activité des recepteurs oestradiol en le complexant avec un His-tag. je voulais savoir si l'his-tag qui entraine une modification de conformation, peut changer le repliement de la protéine donc chnger l'activité de celle ci.  [...] Ben ça pourrait éventuellement. En général on ajoute une séquence de clivage entre la protéine et le tag histoire de l'éliminer après la purif si il pose problème.  [...]

[Biologie Moléculaire] Système d'expression de prot invitro (cell free)

1/ construire deux vecteurs (la protéine a un compagnon accroché), avec des Tag GST (dans la littérature ils préfèrent ce type tag).  [...] Ma question est la suivante. Quelqu'un a-t-il déjà utilisé ce genre de kit pour un application similaire (grande protéine - GST - et levure) Si oui lequel avez vous utilisé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Purification Protéines Tag 6His

.. la protéine a pu subir une dégradation, mais pourquoi juste au moment de l'élution Peut être aussi que seule cette protéine dégradée se fixe aux billes mais pour quelles raisons.  [...] Ce qui arrive parfois avec le [His]6 c'est qu'il se replie sur la protéine, du coup le rendement de fixation est moisi. Une petite dégradation de la protéine pourrait empêcher cela et augmenter l'affinité de cette version pour les billes.  [...]

Transfection et récupérer protéine

je dirais que cela dépend de l'utilisation que vous voulez en faire. Est ce que la protéine doit rester native est-ce qu'il faut la dénaturer quelle est la pureté requise.  [...] Il faut faire attention lors de la synthèse, choisissez bien votre promoteur, cherchez dans la littérature il doit exister des constructions particulières pour les protéines membranaires. Faites également très attention au détergent que vous utiliserez lors de l'extraction pour essayer de la garder votre protéine la plus soluble possible.  [...]