• Forum - Protéine, Culture, Bactéries, Quantité

[Biochimie] Induction d'une protéine

La 1ère étape de la manipulation consiste à mettre au point les conditions de surexpression de cette proteine, pour cela on dispose d'une préculture de bactéries recombinantes permettant de produire l'adénine désaminase, je dois différentes conditions d'inductions ( Milieu LB / Milieu TB) ainsi que variation de la quantité d'IPTG, la DO d'induction est de 0,6.  [...] Je me demande aussi quels sont les facteurs qui peuvent faire varier l'expression de ma protéine le milieu de culture la température dans laquelle les bactéries vont évoluer la quantité d'IPTG peut être.  [...]

[Biotechnologie] Biotechnologies....

A mon avis tu dois pouvoir trouver des labos qui par exemple travaillent sur les cellules-souches, les cultures cellulaires, etc... bien sûr dans l'intitulé du laboratoire tu n'auras pas maladies génétiques, mais ce que tu feras aura quand même pas mal de rapport avec les maladies génétiques, les techniques de soin qu'on envisage, etc.  [...] Par exemple produire une proteine recombinante peux se faire sans materiel particulier ou au contraire avec des instruments sophistiques, tout depend de l'echelle de production, de la purete et de ce qu'on veut en faire.  [...]

la décomposition

J'aurais tendance a dire oui, car après décomposition par les bactéries et les champignons, cela fournit une source d'azote exploitable (via la dégradation des protéines)...mais, en même temps, tout doit être question de quantité et des espèces en culture considérées.  [...] ) Cela reste organique mais sans structure reconnaissable, sorte de terreau. Ensuite d'autres bactéries vont minéraliser lentement les molécules organiques pour les rendre assimilables par les racines des plantes.  [...]

croissance bactérienne et acide

J'avais compris qu'une bactérie donné a un pH limite au-dessous duquel elle ne peut plus se développer. Les logiciels de modélisation de croissance bactérienne s'appuient essentiellement sur les paramètres température, aW et pH... mais pas sur le pKa.  [...] la croissance des bactéries est proportionnelle à la quantite de milieu adequat dont elles disposent, cette croissance génére de l'acide dans le milieu de culture en proportion, je pense que la plupart des bactéries ne poussent plus dans un milieu acide.  [...]

[Biochimie] Transfert western blot raté

Je souhaite induire une protéine à partir d'un système procaryote (en E.coli) grâce à l'IPTG. J'ai donc fait des tests d'inductions sur des petits volumes de culture (5ml). J'ai lysé mes bactéries puis déposé la fraction totale sur gel SDS-PAGE. Après coloration j'ai pu déterminer que ma protéine d'intérêt était induite (taille estimée 74 kDa).  [...] Bref, j'ai fait un transfert il y a 2 semaines avec un protéine purifiée...c'était magique. transfert impeccable, rouge ponceau OK et tout le reste aussi. Mais là je donne ma langue au chat, mon premier transfert était complètement de coté avec des bandes en zig-zag, on m'a dit qu'il devait y avoir une bulle qui a géné le transfert.  [...]

[Biologie Cellulaire] ultracentrifugation et cellules!

je voudrais réaliser des ultracentrifugations différentielles afin de déterminer la localisation d'une protéine spécifique qui m'intéresse. mais au lieu de le faire sur tissu, j'aimerais le faire à partir de culture de HEK. Auriez vous une idée du nombre de cellules dont j'ai besoin pour avoir au final une quantité de proteine suffisante pour faire des western.  [...] Tout dépend du compartiment cellulaire que tu veux isoler, de la représentation de ta protéine dans ce compartiment...Donc c'est par l'expérience que tu sauras quelle quantité de cellule te permet d'avoir une bande convenable en western. Pour commencer tu peux essayer plusieurs conditions où tu auras mis un nombre croissant de cellules.  [...]

surexpression d'une protéine dans E.coli

je suis en train d'essayer de surexprimer une protéine dans E.coli, et elle me pose beaucoup de problème. l'expression de la protéine en question est induite par l'addition d'IPTG dans le milieux de culture (milieux LB). et j'arive à la produire, le problème est que ma protéine qui devrait être soluble, je ne la retrouve plus dans les protéines solubles mais dans le culot après sonication des bactéries.  [...] ta proteine se retrouve dans des corps d'inclusions. Fais ton induction par l'IPTG à differentes temperatures (30, 25 ou 20°). le metabolisme de la bacterie sera reduit, et cela laissera plus de temps à ta proteine pour etre repliée.  [...]

[Génétique] GFP et autre protéines fluorescentes

- Pour pourvoir mener mon expérience d'une manière plus colorée, j'aurais voulu également commander des plasmides pour CFP (cyan fluorescent protein), YPF (yellow fluorescent protein) et RFP (red fluorescent protein). Il y a en encore d'autre, je crois, mais je n'ai pas réussi à trouver si pour ces dérivés de la GFP, la méthode de culture par bactéries était pareille.  [...] - Ensuite petites questions pour les cultures. Une fois mises en culture sur des plaques de pétri, mes bactéries vont-elles se développer plus ou moins à l'infini Enfin, je vais obtenir des colonies, vont-elles encore se développer ou vais-je devoir systématiquement ré-insérer des plasmides dans des nouvelles afin d'obtenir une quantité de bactéries relativement grande.  [...]

[Microbiologie] Lactocoques

Je vouderai juste savoir comment tu as fais pour identifier tes lactocoques, parceque moi j'ai des bacteries isolées des selles de nourisson en aspet de coques et je sais pas comment faire pour savoir si c'est des lactoques ou autre. Est ce qu'il faut utiliser une galerie api20E ou galerie à 50.  [...] ensuite en les plaçant sur des boites de pétri contenant ton milieu de culture gélosé avec ajout de CaCO3, tu pourras constater la précipitation du calcaire suite à la production d'acide lactique par les bactéries (il y aura présence d'un halo de décoloration/précipitation de la gélose très important car la quantité d'acide est énorme).  [...]

[Biochimie] Nickel et congélation ...

Ce peptide forme des corps d'inclusion justement d'où l'utilisation d'urée aussi pour les récupérer. En fait j'ai testé plusieurs choses et il faut que je recoupe tout ça. J'avais testé avec de la guanidine aussi mais là je retrouve mon peptide dans le culot après la lyse des bactéries.  [...] Sinon, plutot que d'éviter à tout pris que ta protéine ne s'agrège... pourquoi ne pas utiliser cette caractéristique comme moyen de purification.  [...]