• Forum - Protéine, Contrôle, Concentration

[Biologie Moléculaire] développement de la drosophile ..ftz et eve...??

pourquoi cela puisqu'on a dit que la protéine bicoid suivait un gradient de concentration, elle ne peut pas induire de façon cyclique l'expression de EVE (puisque c un gradient).  [...] Déjà, il n'y a pas de concentration de gène... Lorsque tu écris quelque chose en sciences, fais un effort d'être rigoureuse. La protéine BCD contrôle l'expression du gène hb, car BCD est un facteur de transcripition.  [...]

[Biochimie] Comment lire et interpréter un Immunoblot ?

L'actine est, bien entendu, une protéine ubiquitaire dont on estime que les différents traitements appliqués aux cellules ne vont pas modifier la concentration. Ainsi, on s'en sert pour certifier que l'on a bien déposer la même quantité globale de protéine dans les deux puits (contrôle et expérimental).  [...] en présence du siRNA UPS1 on a des bandes beaucoup plus sombres qui correspondent aux proteines PCNA ubiquitinilés, et dans la conditions control,on a une faibles ubuiquitinations des PCNA.  [...]

[Immunologie] Comparaison impossible entre 2 lots anticorps secondaire polyclonal

Pour cela, nous effectuons une courbe standard en 5 points a partir d une préparation purifié de cette protéine pour laquelle ont connait la concentration. Sur le même gel se trouvent les échantillons a doser et un contrôle.  [...] pour cela, nous migrons 2 gels en parallèle (5 points courbe standard et 5 contrôle/gel). Nous utilisons ensuite le même anticorps primaire pour les 2 gels. Et ensuite pour un gel nous utilisons le nouveau lot et pour l autre le lot aactuel.  [...]

western blot, protéine phosphorylée et protéine totale?

Finalement GAPDH est lui un contrôle de charge, tu peux faire actine ou tubuline, c'est juste pour montrer que tu as loadé sur ton gel la même quantité de protéine. Ca sert à la normalisation.  [...] Pour s'assurer d'une phosphorylation d'une protéine, une expérience de contrôle en présence de phosphatase doit être menée pour bien vérifier que la modif post-traductionnelle est une phosphorylation.  [...]

[Biologie Moléculaire] normalisation western blot après fractionnement cellulaire

Je fais un fractionnement cellulaire et j'obtiens la fraction cytosolique, membranaire, nucléaire et cytosquelettique. Ensuite je fais un western blot pour ma protéine d'intérêt dans chacune de ces fractions mais pour pouvoir la quantifier, je cherche une protéine contrôle pour normaliser mes résultats dans les fractions cytosoliques et membranaires en premier lieu.  [...] Quelle protéine peut être assez fiable à utiliser comme contrôle dans chacune de ces fractions.  [...]

[Biologie Moléculaire] difference de detection

Pour tes problèmes de détection, il faut savoir si ton échantillon induit et ton échantillon contrôle ont été traités de la même manière. Il faut concentrer la protéine. culotter les bactéries puis les reprendre dans du laemmli (je fais 1ml de culture, centri, reprise dans 200ul laemmli 1X, centri, dépôt de 10-20ul).  [...] on a ensuite preparé 2 TUBE DE 15 UL davec ajout de 5 ul de bleu de charge POUR FAIRE DEUX GEL.UN EST EXPOSé a la coloration coomassie et lautre pour faire le transfere.Le problème est que pour les résultats au comassie on voit rien.c'est a dire pas de bande pour notre protéine qui normalement devrait être surexprimé.  [...]

[Biologie Moléculaire] augmentation du taux d'ARN mais non celui de la protéine

Ta protéine est une protéine nucléaire Est tu certaine de bien libérer toutes les protéines dans ton extrait protéique En particulier vas tu assez loin dans la concentration en KCl Si cela se trouve ta protéine reste fixée sur l'ADN.  [...] Maintenant, je te l'accorde, ces questions ne concernent pas le soucis de la détection de la protéine. Sachant que la protéine est détectée en WB dans le contrôle positif et négatif, ce n'est pas un soucis de détection.  [...]

N glycosylation

Une protéine N glycosylée qui a son groupe de 14 monosaccharides, pour qu'elle puisse passer dans le golgi, il y a des glucosidases qui vont enlever les 3 glucoses. Mais ensuite, pour le dernier mannose du groupe d'oligosaccharides, la mannosidase va l'enlever avant ou apres le passage dans le golgi.  [...] Du coup, le mannose fait aussi partie du controle de qualité de protéine ou non comme il y a deja eu controle au niveau des glucose, par la calnexine/calréticuline, cela ferait en quelque sorte un 2eme controle.  [...]

pourquoi les protéines dénaturée sont dégradées

et ce repliement est essentiel au fonctionnement de la protéine. Il y a un système de contrôle qui vérifie le bon repliement de la protéine glycosylée. Si elle est mal repliée, le système de contrôle empêche son adressage aux structures suivantes (je vais pas détailler).  [...] L'adoption de la structure fonctionnelle d'une protéine nécessite l'intervention d'autres protéines, dites chaperonnes. Sans parler de coagulation, une protéine dénaturée par rupture des interactions faibles ne pourra, de toute façon, adopter instantanément sa conformation initiale.  [...]

[Biologie Cellulaire] Notion de contrôles, contrôles isotypiques, culture cellulaire

C'est bien ça, on utilise un anticorps contrôle de même isotype que l'anticorps ciblant la protéine d'intérêt.  [...] Bah si l'anticorps qui cible votre protéine d'intérêt est un IgM, l'anticorps contrôle doit être un IgM. Si il s'agit d'un IgG, le contrôle doit être un IgG.  [...]