• Forum - Protéine, Contrôle, Clones

phosphorilation de la proteine focal adhesion kinase

Apres avoir cree des clones [ knock out] d'un gene donne (fer tyrosine kinase) jai compare la phosphorisation de la proteine FAK entre mon controle et mes clones (knock out). j'ai pu observe une nette augmentation de la phosphorisation dans mes clones dans mon western blot (apres 48h).  [...] pourtant, lorsque je realise exactement la meme experience en faisant une coloration et en observant au microscope, je ne parviens pas a retrouver cette nette augmentation de la phosphorisation ( comme observer precedement dans le western blot quelqu'un saurait pourquoi ( voir images) chacune des experiences a ete realise plusieur fois. merci.   [...]

[Biologie Moléculaire] Expression de protéines grâce au pGEX. DH5alpha ou BL21?

Je suis en train d'analyser de nouveaux clones pour avoir la protéine parfaite. Cependant ma question est. est ce que c'est réellement grave quand on diverge d'un acide aminé dans un domaine conservé Est ce que vous utilisez toujours des clones codant pour des protéines parfaites pas Au contraire, avez vous eu des expériences malheureuses à cause d'une mutation.  [...] De la même manière j'ai co-migré un extrait protéique obtenu après transformation des bactéries avec un pGEX vide et là aussi la colonne reste entièrement vide. Ces contrôles signifient bien que mon anticorps ne marque pas une protéine bactérienne endogène ou un bidule provoqué par l'insertion du seul plasmide.  [...]

Et si c'était aussi simple?

Au cours de cette évolution, des mécanismes de contrôle du cycle cellulaire et de réparation de l'ADN tentent de corriger ces mutations et si c'est insuffisant, d'amener une cellule tarée vers l'apoptose. Mais ces mécanismes ne sont pas toujours efficaces et, au fil du temps, des cellules accumulent des mutations qui ne sont pas réparées et sont même reproduites au cours des prochaines mitoses.  [...] Avec le temps, un clone néoplasique évolue également. D'autres cellules appartenant à ce clone vont continuer à régresser et à acquérir de nouvelles propriétés pour former de nouveaux clones d'autant que les protéines de contrôle du cycle cellulaire sont altérées empêchant toute réparation possible.  [...]

TPE Génétique du vieillissement

Je ne suis pas un expert en la matière, mais il me semble que le vieillissement cellulaire est en rapport (en partie) avec les télomérases, enzymes clivant une courte séquence des télomères (c'est le bout des chromosomes) à chaque mitose. Au bout d'un moment, les chromosomes sont trop endommagés et la cellule doit mourrir.   [...] slt moi aussi je travaille sur ce sujet enfin moi c'est plutôt la progeria et je voulez savoir si ca te dirais kon entre en contact pr peut-être écahnger des informations.   [...]

[Biologie Moléculaire] doxycycline tet-off en transitoire ?

Je dois tester en transitoire deux plasmides avec un gène sous le contrôle d'un promoteur inductible (TRE) dans une lignée tet-off avant d'effectuer des clones stables.  [...] Ces cellules sont en présence ou absence de dox pour avoir des contrôles depuis plusieurs jours, cependant, ma question est.  [...]

[biologie moléculaire] Probleme expression apres transfection stable

J'ai réalisé une construction en vue de l'expression d'une protéine en stable par des cellules HeLa. Le vecteur utilisé est le pIREShyg3, qui comme son nom l'indique contient.  [...] La construction a bien marché, le séquençage est OK, les cellules transfectées résistent à l'hygromycine (pas les cellules non transfectées contrôle), mais pas de trace de notre protéine, rien. alors que l'expression est importante avec un vecteur pCMV en transitoire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Construction d'une banque d'ADNc

contrôle-qualité de l'ADN recombinant. transformation dans E. coli, sélection des clones recombinants et extraction du vecteur d'expression.  [...] La methode indiquée peut etre utilisée seulement quand tu cherches a cloner l'ADNc d'un gene connu (afin notament de le cloner sans ses introns), mais evidemment tu ne peux pas partir a la peche aux genes inconnus (sauf a utiliser des amorces dégénérées calculées a partir de regions hautement conservées dans les protéines de cette famille.  [...]

[Biologie Cellulaire] Test statistique sur petits échantillons

Dans mon cas, je ne peux pas avoir plus de deux échantillons par clone (dû à la technique de clonage). Par contre je devrais obtenir d'avantage de données prochainement (plus de contrôles et plus de clones). Mais je n'en aurai pas non plus 200, au mieux une cinquantaine de contrôle et une cinquantaine d'individus clonés.  [...] Pour être plus clair (parce que je me suis relu et que ça ne l'est pas du tout), je cherche à savoir si la différence entre deux individus génétiquement identiques (A1-A2, B1-B2, &) est différente de la différence entre deux individus génétiquement différents que ce soit d'une part des individus clonés (A vs B vs C&) ou témoins (A vs Contrôle, B vs Contrôle, &) (pfiou.).  [...]

biologie de l'hépatite virale C

NS4A sert comme cofacteur de NS3 pour le clivage de la jonction NS3-NS4A. NS4B présente un rôle plausible dans la réplication virale. NS5A ainsi que la glycoprotéine E2 présentent un rôle dans la résistance virale à l'interféron.  [...] Partant du plasma d'un chimpanzé infecté, les acides nucléiques ARN en ont a été purifié pour être transcrits en ADN complémentaires. Celui-ci au génome d'un bactériophage pour une expression de l'information sous forme de protéines. Parmi les très nombreux clones ainsi produits, l'un d'eux a été reconnu comme exprimant une protéine virale, car cette protéine a été reconnue par un sérum de convalescent d'hépatite non_A non- B.  [...]

biologie moleculaire

voila j'ai une question qui conserne les vecteurs de clonage, on a étudié les plasmides, les phagemides, les bacteriophages et les cosmide (j'espere que je n'en ai pas oublié...) et le prof nous a demandé de lui construire un vecteur de clonage complet je ne sais pas s'il suffit juste d'additioner tous les elements qui, a mes yeux, sont interessants.  [...] Pour un clonage pur, un nombre moyen suffit, sauf si tu clones un gène qui est susceptible de coder une protéine un peu toxique, un faible nombre de copie est préférable.  [...]