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dimère

Ce qui est le plus étrange c'est que le monomère s'observe dans le surnageant et le dimère dans la partie soluble (cytoplasme là où ma protéine normalement devrait être produite).  [...] Pour la protéine dans le surnageant j'ai fait un Ms c'est sur que c'est ma protéine. L'autre dans la partie soluble elle est plus intense encore que ma bande qui est dans le surnageant mais je n'aurais pas le temps de faire un MS.  [...]

Déterminer état de dimérisation d'une protéine

Berzelius. La seule façon que je vois pour créer des liens covalents c'est des mutants de surface type cystéine pour justement former des ponts disulfures. A part ça je ne vois pas trop. Mais au final, même si on a une idée des interactions ça ne permet pas de déterminer l'état d'oligomérisation de la protéine, si.  [...] Sinon tu parles d'un gel en conditions non dénaturantes, perso je n'ai jamais fait que de la SDS-Page... Tu connais une technique sur gel qui permet de garder la protéine intacte (Là tu m'interesses beaucoup ).  [...]

[Biotechnologie] Culture bactérienne et protéines recombinantes en plaque 96 puits

Je souhaite réaliser des tests d'expressions de protéines recombinantes (système bactérien) en format plaque 96 puits (différents vecteurs, TAG, condition de culture, souche bactérienne etc). Je suis à la recherche d'un système permettant, après la lyse du culot bactérien, de séparer rapidement les fractions solubles et insolubles des protéines, directement en système 96 puits.  [...] Je réalise déjà des tests d'expression de protéines recombinantes (sreening des meilleures conditions) mais en format tube...et ça prends beaucoup de place pour gérer la quantité d'échantillons. Habituellement, je réalise une étape de centrifugation à 15000g 30min 4°C en tubes, après la lyse bactérienne via un tampon de lyse commercial, pour séparer les fractions solubles/insolubles et analyser dans quelles fractions se trouvent la protéine produite (par SDS PAGE/WB/ELISA).  [...]

Immunoblot

C'est tout à fait ça. Et pour le western, on détecte les protéines avec un anticorps dirigé contre la protéine d'intérêt, cet anticorps lui-même porteur d'une activité détectable (fluorescence, activité enzymatique, radioactivité). C'est donc une variante du SDS-PAGE, car c'est toujours une électrophorèse de protéines sauf qu'on n'est pas en conditions dénaturantes et qu'on détecte avec un anticorps.  [...] C'est donc une variante du SDS-PAGE, car c'est toujours une électrophorèse de protéines sauf qu'on n'est pas en conditions dénaturantes et qu'on détecte avec un anticorps.  [...]

[Biochimie] technique PAGE non dénaturante

Bonsoir tout le monde, j'aimerais bien connaitre le principe de la technique de séparation des proteines PAGE en condition non dénaturante et quel est la différence entre PAGE et SDS page et utilités.  [...] PAGE en conditions dénaturantes. les protéines sont traitées de façon à les délier et à séparer d'éventuelles sous-unités. On détruit donc leur structure tridimensionnelle. La forme de la protéine n'intervenant plus dans la migration, celle-ci se fait uniquement sur la base de la masse de la molécule. L'interprétation est généralement plus simple.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vrai ou faux : Daltons et taille moleculaire

En SDS page, tu es en conditions dénaturantes. La densité de charge dans les protéines est considérée comme constante. Quand tu appliques un champs électrique, une protéine plus grande subira une plus grande force, mais il ne faut pas oublier qu'elle sera aussi plus lourde.  [...] Dans un SDS PAGE tu dénature la protéine qui devient dès lors linéaire. Mais tu ajoutes aussi du SDS qui est un détergent ionique qui va charger négativement l'ensemble de tes protéines. Du coup, la charge globale intrisèque de la protéine n'entre plus en jeu dans la migration, seule la taille compte.  [...]

[Biochimie] Isolement des protéines du périplasme de Bactéries + Test d'activité spé d'une protéine en SDS-PAGE

Alors je pense que c'est plutôt une histoire de vocabulaire, mais pour prouver la localisation de la protéine dont ils étudient l'adressage, les auteurs parlent toujours de tester l'activité spécifique de SodA par SDS-PAGE ou autres techniques d'électrophorèse.  [...] Ce que je comprend pas c'est le lien entre activité spécifique et électrophorèse. L'électrophorèse en sds-page permet de séparer les protéines selon leur taille et donc d'identifier des protéines dans des extrait donnés, mais quel rapport avec l'activité spécifique de la protéine serait-ce simplement le fait que comme ils on des préparation périplasmique pure de contamination et qu'il test la présence de la protéine SodA dans ce compartiment qu'ils appellent ça activité spécifique du périplasme.  [...]

[Biochimie] DTT et WesternBlot

WesternBlot on ne peut pas plus classique. dénaturation des protéines 10min à 95°C dans du tampon de Laemli (contenant donc du SDS...). Bien sûr SDS-PAGE pour la migration... Donc en conditions dénaturantes.  [...] Alors je me demande vraiment si les étapes de préincubation au DTT étaient nécessaires, pour des protéines de rats je sous-entends (Pour des protéines d'organismes thermophiles par exemple ou autre organisme extrème on aurait pu se poser la QS de savoir si le bleu de Laemmli utilisé couramment induit des conditions de dénaturation suffisantes...).  [...]

Interaction entrée viral protéine cellulaire

Salut, je te remerci de ta réponse et c'est déjà ce que je pensais mais je doutais, par contre la 1iere D doit etre fait dans des conditions dénaturante comme le BN-Page. Et apres il faut que je vérifie si la ou les protéines identifiés servent dans l'infection virale.  [...] Quitte a synthetiser une proteine recombinante autant faire un pull-down avec une fusion GST-proteine X. Si tu utilises une etape anticorps, ne pas oublier de cross-linker l'anticorps avant l'IP... Un autre detail, identifier des proteines membranaires par mass spec n'est pas une partie de plaisir.  [...]

Electrophorèse bidimensionnelle VS unidimensionnelle

L'électrophorèse bidimensionnelle (2D-E) consiste en une séparation des protéines en deux temps. l'isoélectrofocalisation (IEF) sépare les protéines selon leur point isoélectrique (pI) puis une migration en conditions dénaturantes sur gel de polyacrylamide (SDS-PAGE), perpendiculairement à l'IEF, sépare les protéines selon leur masse moléculaire (MW).  [...] Après coloration des protéines séparées, on obtient un gel pouvant contenir plusieurs centaines voire plus d'un millier de spots protéiques. L'ensemble de ces spots représente le profil protéique de l'échantillon étudié (cellules, tissu, etc...). La comparaison de profils protéiques correspondant à des états particuliers, par exemple sain et malade, permet de déceler les protéines liées à ces états.  [...]