• Forum - Propos, Méthode, Western, Protéines, Dosage, Manipulation

[Biologie Moléculaire] Biochimie: méthode de Western Blot

Quand je fait une recherche sur internet à propos de la méthode de Western Blot qui sert à identifier et détecter des protéines je trouve qu'il faut réaliser un dosage avec la méthode de Biuret avant la manipulation. Je ne comprend pas pourquoi réaliser ce dosage vu qu'il sert seulement à connaitre la concentration en protéine d'une solution.  [...] En fait, doser les protéines avant un Western blot permet de déposer la même quantité de protéines dans chaque et pour chaque échantillon.  [...]

[Immunologie] Western Blot analysis

Lorsqu'on réalise la manipulation de Western Blot sur gel de polyacrylamide SDS, les protéine sont dénaturées par le SDS, Est ce que le cite de reconnaissance avec l'AC spécifique reste intacte,  [...] La réalité est effectivement que certains anticorps ne reconnaissent plus leur cible en WB. Pour sauver la situation on peut tenter plusieurs choses. On peut par exemple faire ses gels à l'urée pour ne pas dénaturer les protéines de la même manière et essayer de préserver son épitope.  [...]

Mutation génétique bénéfique

Mais pour etre encore plus proche de l'exemple que tu souhaite avoir, pour connaitre le role des gènes des plantes une methode longuement utilisée a été la mutagenèse en employant un produit hautement mutagène, celui ci avait pour but de créer des mutation (et fabriquer des plantes tortues ninja puisque tu aimes les analogies autant que moi ), et lorsque l'une de ces plantes présentait un phénotype particulier, on recherchait a savoir quel gène était affecté.  [...] cerevisiae t on criblé les bactéries afin d'en trouver une qui portait la meme mutation que ce qu'ils avaient obtenu par méthode OGM, il en on finalement trouvé une identique, mais cette fois ci etant donnée qu'il n'y avait pas eu de manipulation a proprement parlé OGM elle a été autorisé.  [...]

[Biochimie] Lysozyme

Bonjour, je suis en Terminale STL au lycée, j'ai comme devoirs de trouver une manipulation un dosage enzymatique pour vérifié l'activé (mode d'action) de la lysozyme de la lysopaïne. Je sais déjà que cela agit sur les GRAM+ et qu'il y beaucoup de manipulation d'après mes recherches mais je ne les comprends pas. Merci d'avance de votre aide.  [...]

[Immunologie] Méthode ELISA

'ai fait un DUT génie bio il y 'a déja quelque année et c'est vrai que tu étudie la méthode ELISA en cours plus quelque TD. Tu en fais aussi réguliérement en immuno clinique pour doser les sérums mais en tout cas tu ne devient en aucun cas un spécialiste de cette méthode.  [...] Il y a le CPE à Lyon, qui dispense une formation theorique et pratique en partenariat avec un labo du coin à des professionnels desirant ameliorer leurs competences. Au programme, cours assez scolaire sur les antigenes / anticorps, immunologie.   [...]

Muc1

Merci bcp,,, je voudrais monté un projet en utilisant MUC1 comme cible,,, dans un premier temps,, est-que des cellules CHO pourrait exprimer la MUC1,,, si c'est possible,, ça pourrait me donner un modèle cancereux,,, je voulais essayé de changer (casser) les sucres sur la proteines ou certains d'entre eux avec des glycohydrolases  [...] on m'a pas preciser le budget,,,, et je n'ai que 50h dans le labo pour faire mes manipulations,,,,, j'ai dans les 1 mois et demi pour préparer théoriquement mes manipulations,,et mes protocoles,,, et c'est vraie que la pluparts des methodes utilisée sont Nouvelles pour moi,,, je sais que ça parrait irréalisable,, dailleurs j'ai des doutes a propos de mon projet,, c'est pour cela que je vous demande de l'aide,,, afin de changer un petit peu l'idée des manipulation,, j'ai une autre idée plus basique en tete,,, qui serais de travailler sur des cellules épitheliales et des Escherichia Coli,,, toujours au niveau de MUC1,,, je n'aurais pas besoin de faire les transfections,,, et je pense que j'aurais le tps de voir un petit peu l'adhesion de ces cellules par rapport a MUC1.  [...]

[Microbiologie] Détermination de la concentration bactérienne (E.coli) en ufc/ml par untié DO

S'il vous plait de m'aider à déterminer la concentration bactérienne (cas de E. Coli 0157H7) en UFC/ml pour une Unité DO (1 D.O-. ufc/ml). je dois préparer une suspension de 10^9 ufc/ml pour procéder à une immunisation des lapins.   [...] Il est probable que vous effectuiez votre manipulation à partir d'un kit, lequel contiendra un étalon de DO afin de faciliter le dosage comparatif de votre concentration bactérienne.  [...]

protocole d'extraction d'ADN

Tout ce qui s'appelle miniprep midiprep ou maxiprep correspond à une extraction d'ADN plasmidique. Le lien que vous proposez est une méthode de miniprep. Il ne vous intéresse donc pas si vous cherchez à purifier l'ADN génomique.  [...] le prof me demande de lui trouver tous les methode d'extraction possible leur ingrédient et les problèmes qu'on peut rencontré lors de la manipulation.  [...]

[Biochimie] Problème de migration de gel

Est ce que ca ne pourrait pas être du à la manipulation des échantillons Méthode d'extraction, dégradation (température du labo ), contamination Avez vous essayé avec des échantillons standards, ou provenant d'autre labos.  [...] Si oui, il est possible que les acides aminés soufrés (met et cys) reforment leurs ponts dissulfures entre eux créant des sortes d'amalgames et empêchant les protéines de migrer correctement au travers le maillage du gel.  [...]

[Biologie végétale] Absorbance du maïs et de l'orge

Bonjour, je viens d'effectuer une manipulation au cours de laquelle je dois analyser l'importance du fonctionnement de deux enzymes. la catalase et la peroxydase grâce,en partie, au dosage de la catalase par le permanganate de potassium et la peroxydase par spectrophotométrie.  [...] Chez les plantes C4. je sais aussi qu'il y fixation d'un CO2 grace à la PEPC sur le phosphoénolpyruvate, ce qui donne de l'oxaloacétate, puis au à NADPH qui réduit l'oxaloacétate en malate (grâce à la malate déshydrogénase). Le malate passe ensuite dans les cellules de la gaine périvasculaire (précédemment on était dans les cellules du mésophylle).   [...]