• Forum - Promoteur, Vecteur, Plasmide, Site, Schéma

transgénèse végétale

Dois-je prendre des primers qui ont un site de restriction bien spécifique pour pouvoir mettre l'ADN amplifié dans le vecteur ti désarmé après Quel doit être la longueur du primer environ.  [...] Le promoteur 35S faut-il que je le clone aussi dans le vecteur ou est il généralement déjà dans les plasmide ti désarmé avec un site polylinker Si quelqu'un connait un site ou il y a un schéma ce serait super.  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN antisens à partir d'un fragment de gène

Un plasmide vecteur de clonage créé artificiellement peut avoir autour de son MCS (Multiple Cloning Site) deux promoteurs différents (phages T7 et SP6), ce qui peut donner lieu à deux ARN (un sens et un antisens), selon que le démarrage de la transcription se fasse à un promoteur ou à l'autre.  [...] Ce plasmide sera utile car fournisseur de sondes pour des Northern blot (Southern blot pour de l'ARN et non plus de l'ADN) ou de la transcription traduction artificielle comme expliqué ci-dessus.  [...]

[Biochimie] pBluescript II KS

Bonjour, j'aimerais savoir que signifie le KS à la fin de PBluescript II KS.   [...] Le plasmide KS a le site de restriction pour KpnI proche du promoteur LacZ alors que le plasmide SK a le site pour SacI proche du promoteur.  [...]

[Biologie Moléculaire] Quelques questions ??

3-si par exemple on coupe un plasmide par Bamh1 et on insere une sequence d'adn. Comment peut on verifier la presence de ce fragment ajoute dans le plasmide.  [...] Le vecteur d'expression contient en plus de la séquence de résistance et du site de multi-clonage et du site d'origine, il contient en plus un promoteur.  [...]

levure s. POMBE

le gène d'intérêt est alors inséré dans un vecteur (en général un plasmide), qui doit être capable de se répliquer et de répliquer le gène étranger qui lui est rattaché.  [...] Après tout ça je dois essayer insérer la bonne séquence dans un plasmide (Vecteur) et n'oublie pas la procéder par une bonne promoteur. Puis les méthodes de transfection nous aideront à introduire le gène dans la cellule méchante.  [...]

[Biotechnologie] Fabrication d'une protéine d'intérêt ?

Il manque une étape entre la production du cDNA et la transfection dans les cellules. Le cDNA est inséré dans un vecteur d'expression qui contient outre les éléments classiques d'un vecteur (Ori, MCS, marqueur de sélection) un promoteur de transcription ainsi qu'un RBS (ribosome binding site) qui va permettre la traduction du transcrit.  [...] Il y a une autre voie intermédiaire qui est de chercher si il n'existe pas la séquence que l'on cherche dans des banques de plasmides. Là c'est beaucoup moins cher, un peu moins de 100€ le vecteur.  [...]

[Biologie Moléculaire] Numérotation des sites de restriction

la numérotation correspond au premier nucleotide du site de restriction. Le 0 est généralement donné sur le plasmide. sinon il est pris de maniere arbitraire.  [...] Je n'ai pas compris votre réponse. Je vais essayer d'expliciter ma question. En fait j'ai un plasmide psp72 et un insert pst1 et entre le promoteur sp6 et le site de restriction pst1(l'insert) il y'a un écart ce qui est normal. Mais le site de restriction pst 1 porte le numéro 32 et je n'ai pas compris comment le prof a trouvé ça.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ribosonde

- La séquence d'intérêt clonée dans un vecteur (plasmide, ADN donc) contenant un promoteur viral (T7, T3 et SP6 sont les plus utilisés).  [...] - Mélanger les ingrédients afin d'obtenir une réaction de transcription de la séquence d'intérêt à partir du promoteur viral. Lors de la transcription, l'UTP radioactif sera utilisé et l'uracile marquée sera ainsi incorporée à l'ARN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteurs, gènes et plasmides

En fait j'ai un petit soucis, je ne comprend pas le rôle indispensable d'un promoteur pour un gène, en particulier lorsque l'on insere un gene d'interet dans un plasmide vecteur.  [...] Généralement dans les plasmides que tu utilises pour faire tes clonages le promoteur est de base sur ton plasmide,il est compris de série on peut dire. Il servira pour le gène que tu insères dans ton multi site de clonage.  [...]

[Biologie Moléculaire] perte spontanée d'insert lors du clonage

En fait, j'ai fait un clonage. j'ai essayé d'inserer un gène (2,5kb) dans un plasmide (10kb, pCambia 1300), en aval d'un promoteur (qui lui est déjà préalablement inséré dans le même plamide). Mais comme je travail sur un même site (SacI), j'ai réussi (après beaucoup de galère) à avoir une clone positive mais avec mon insert inversé (criblé par pcr et vérifié par digestion).  [...] Je refait le manip (dépuis le pcr des colonies positifs, avec comme controle le plasmide vide) pour confirmer que je me suis pas trompé de colonies mais ça donne toujours la même chose. Donc je commence à penser que les bactéries rejettes mon insert et seulement quand celui-ci est dans le sens que je veux.  [...]