• Forum - Promoteur, Séquence, ADN

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

La séquence insérée là dedans ne sera qu'amplifiée, jamais exprimée étant donné qu'il n'y a pas de promoteur de transcription.  [...] pGL2 est un vecteur un peu plus compliqué. On trouve une f1 ori + polyA coding sequence qui a du vous perturber. Cette construction sert à produire de l'ADN simple brin, si besoin. La polyA cs juste derrière sert à insérer un terminateur histoire d'éviter qu'un promoteur cryptique ne vienne produire des transcrits non désirés (réducteur de bruit de fond).  [...]

[Biologie Moléculaire] Site d'initiation de la transcription

A ma connaissance, le promoteur est une région non transcrite de l'ADN en amont de la séquence à transcrire. Peut-être existe-il des exceptions.  [...] ..). S'il y a utilisation d'un point +1 en amont du promoteur considéré, alors ce promoteur est transcrit (dans ce cas là on ne dit pas que c'est un promoteur, c'est juste une séquence faisant partie de l'unité de transcription débutant par le point +1 considéré).  [...]

séquence promotrice / séquence régulatrice

Dans le sens où les polymérases ont une affinité différentes en fonction de la séquence du promoteur (qui est un élément obligatoire pour la transcription.) on peut dire que le promoteur fait partie de la région régulatrice.  [...] exemple chez les eubactéries. Plus la séquence du promoteur est proche de la séquence consensus (TTGACA -quinzaine de nucléotides- TATAAT) plus l'affinité de l'ARN polymérase pour le promoteur est forte et plus il y a de transcription du gène sous contrôle de ce promoteur.  [...]

[Biologie Moléculaire] Il y a t-il une séquence promoteur chez les eucaryotes?

Il existe des UPE (upstream promoteur elements) ou DPE (downstream) = autres séquences de liaison en amont ou en aval du promoteur au sens strict.  [...] Maintenant pour ce qui est de la séquence du promoteur chez les eucaryotes, plusieurs promoteurs contiennent une séquence appelé boite TATA au environ de -25 pb en amont du point de départ, certains gènes contiennent un élément initiateur au lieu d'une boite TATA qui est localiser autours du site de départ (+1) et qui possèdent une cytosine à la position -1 et une adénine à la position +1.  [...]

Insertion d'un promoteur sur un vecteur plasmidique

A désolé j'avais pas vu que tu demandait aussi comment l'isoler. Bein les séquences de ce types de promoteur sont archi connues donc quand tu commandes tes amorces, tu peux leur demander qu'ils te rajoutent ta séquence promotrice en amont de ton amorce 5' et le tour est joué.  [...] Et puis la PCR pour mettre un promoteur, cela me semble tout à fait convenable. Un promoteur minimal fait combien à peu près, dans les 50 bases au max. Admettons qu'on prenne une séquence en 5' de 50 bases qui s'hybride à notre fragment, cela est suffisant pour avoir une hybridation spécifique, et notre amorce fait donc 100 bases.  [...]

Animaux transgéniques

en général tu mets la séquence à exciser entre deux site Cre et le gène de Lox avec un promoteur conditionnel.  [...] La cre (recombinase) est placée sous le controle d'un promoteur qui code pour un gène s'exprimant soit à un certain moment, soit selon une localisation précise, soit les deux (il existe certains raffinements, ex. système CreER T2 ).  [...]

Thérapie Génique

Plusieurs traitements sont développés, comme pour lutter contre les cellules cancéreuses ou pour vaincre des virus, j'ai entendu parler d'un ARNsi anti-ARNm apoB pour traiter des cas de cholestérols graves, cependant développer une solution thérapeutique à base d'ARN interféron est délicat et demande beaucoup de travail.   [...] Je sais ce que sont les gènes-médicaments mais on me demande de citer les premiers gènes-médicaments or j'ai visiter pas mal de sites en rapport avec la thérapie génique et également de nombreux livres, encyclopédies... et je n'ai toujours pas trouver ce renseignement.   [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteur banque BAC

J'aimerai globalement connaitre la démarche pour récupérer une séquence promotrice d'une banque BAC pour ensuite le cloner dans un vecteur rapporteur et étudier ce promoteur.  [...] Tout dépend de la longueur de promoteur que tu veux mettre en amont du gène rapporteur. S'il n'est pas très long, tu peux réaliser une PCR avec des amorces encadrant la région promotrice que tu désires. En 5' des amorces tu ajoutes la (les) séquence(s) de restriction correspondant au(x) site(s) de restriction que tu as choisi sur ton vecteur pour l'intégration du promoteur.  [...]

[Biologie Moléculaire] Programme de clonage

J ai vu que lorsque l'on enregistre une séquence on a des options pour entrer les extrémités cohésives, est ce champ là qu'il faut remplir pour obtenir le vecteur sous forme circulaire Auquel cas je n'y suis pas arrivée.  [...] Je vous donne un exemple. en voulant cartographier le plasmide pEGFP-N1 de Clontech ( http.//www.clontech.com/images/pt/di...s/PT3027-5.pdf ), j'ai remarqué qu'après un Scan, le promoteur CMV n'apparaît pas. En effet, la séquence consensuelle diffère de celle de la librairie d'un seul nucléotide (en position 509 de votre séquence, il y a un C, alors que c'est un G dans la séquence consensuelle).  [...]

[Biochimie] étude de promoteur

Faire une analyse bioinformatique de ton promoteur (sequence) pour voir s'il y des séquences spécifiques à certains facteurs (tu sauras déjà mieux dans quelle direction aller...).  [...] Une manip' envisageable est de faire un test rapporteur dans une lignée cellulaire. Vous clonez votre promoteur ou des morceaux de votre promoteur en amont de la séquence codante d'un gène rapporteur (CAT, Luc). Vous cotransfectez avec un plasmide codant pour votre facteur de transcription.  [...]