• Forum - Promoteur, Intérêt, Rapporteur

[Biologie végétale] Différence entre GUS et RT-PCR

Dans le cas du gène rapporteur GUS, tu as localisation de l'expression à un endroit précis in situ. Autrement dit, je souhaite savoir où et quand s'exprime le gène tartampion, je fais donc une construction fusion entre le gène GUS et le promoteur du gène d'intérêt et je suis l'apparition de la coloration bleue.  [...] En ce qui concerne la RT(Reverse Transcriptase)-PCR, tu as affaire à une autre approche. En fait, tu pars des ARN totaux et tu cherches à amplifier le transcrit du fameux gène tartampion. Tu n'es plus in situ. Ce qui est important ici, c'est que tu fais une détection et une quantification des ARNm de ton gène d'intérêt.  [...]

système de double hybride

Donc, le promoteur du gène rapporteur est activé par l'interaction (ou le rapprochement) des deux protéines GAL4. Ce qui permet l'expression du gène rapporteur (et sa visualisation). Ca, c'est la cas classique. Le truc, c'est que l'on ne peut pas s'en servir en l'état.  [...] Pour le test en lui même, on met nos deux protéines chimères ensembles, on attends qu'elles soient exprimées par la levure, puis qu'elles interagissent entre elles (ou pas). S'il y a interaction entre PCR-1 et AST-1, les deux protéines GAL4 seront alors assez proche pour activer la transcription du gène rapporteur.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gène Rapporteur

- soit on place le gène rapporteur après la séquence régulatrice (promoteur), c'est-à-dire qu'on remplace le gène qui nous interesse par le gène rapporteur, et ceci nous permettra de mesurer l'expression du gène.  [...] On peut faire un knock in pour étudier les hétérozygotes si il n'y a pas de problème d'haploinsuffisance. Le plus fréquent est quand même de faire de la transégènese classique, avec promoteur et rapporteur qui s'inserent dieu seul sait où dans le génome.  [...]

T1 et T2 generation GUS

Est-ce qu'il faut s'attendre a des difference entre des expression GUS gene rapporteur (promoteur rapporteur) suivant si on utilise des plantes de generation T1 ou T2. Qu'est ce qu'il vaut mieux utiliser.  [...]

[Biotechnologie] Plasmide recombinant

Donc, par recombinaison entre le pTi et un plasmide contenant notre gène d'intérêt, on obtient un pTi-gène d'intérêt à la place du T-DNA. En général, ce gène d'intérêt est accompagné par un gène de sélection ou rapporteur. dans certains cas, il es possible de trouver des restes du T-DNA au sein de cette construction, mais il existe aujourd'hui des techniques (complexes, comme a dit notre prof) qui permettent de n'avoir que le gène d'intérêt à la place du T-DNA.  [...] Lorsqu'on parle de gène de sélection ou rapporteur, on parle généralement dans ce cas d'un gène permettant aux cellules de survivre dans certaines conditions précises ou tout simplement un gène rapporteur pour savoir quelles cellules ont intégré le gène d'intérêt.  [...]

[Génétique] Mutagenèse

Si j'ai à identifier les bases importantes d'un promoteur qui est déjà dans un vecteur-sonde. (il y a 1000 bases).  [...] Il faut avancé petit à petit. Un bon moyen est de commencé par caractérisé des régions importantes au niveau de ton promoteur. Pour cela tu peux réalisé des délétions de régions de plus en plus importante de ton promoteur et regarder l'impact sur la fonctionnement de ce promoteur en le couplant à un gène rapporteur par exemple.  [...]

hybridation in situ vs rapporteur

Mais a mon avis, le principal avantage de l'in situ est que l'on detecte directement l'ARN present a un moment donne alors qu'avec le gene rapporteur, on s'eloigne un peu de la situation normale puisque l'on a du introduire une construction dans l'organisme (il y a eu des problemes, cf Taylor C.B. (1997) Promoter fusion analysis. an.  [...] Mais tu as raison dans le cas d'une sipmle fusion promoteur-Gene rapporteur. Il est meme parfois pas evident que ca reflete l'expression normakl de l'ARNSm sdi d'autres elements que le promoteur entre en jeu (introns par ex).  [...]

[Biotechnologie] Composants d'un vecteur d'expression eucaryote

Ensuite, on a évidemment notre gène d'intérêt, son promoteur eucaryote, le signal de terminaison de la traduction, les sites de restriction (MCS) et le gène de sélection (auxotrophie le plus souvent ou résistance à un antibiotique). J'en suis à 7 (ou 6 si on compte les ORI pour 1).  [...] J'aurai mis un gène de sélection (un gène de résistance aux antibiotique ou un gène du métabolisme pr la levure) et un gène rapporteur, un promoteur, MCS (un site de clonage multiple). Tu peux mettre le + 1 avec la flèche juste après le promoteur.  [...]

[Biochimie] étude de promoteur

En fait je me suis très mal exprimé, je voudrais faire une rapide analyse bioinfo pour regarder quelques chose sur le promoteur d'un gène. Mais je ne connais pas de logiciel ou de site internet qui me permettraient de faire ça.  [...] Une manip' envisageable est de faire un test rapporteur dans une lignée cellulaire. Vous clonez votre promoteur ou des morceaux de votre promoteur en amont de la séquence codante d'un gène rapporteur (CAT, Luc). Vous cotransfectez avec un plasmide codant pour votre facteur de transcription.  [...]

[Génétique] Elément régulateur du promoteur d'un géne

Bonjour' J'ai un souci comment sait on à quelle distance se trouve l'enhancer qui active le promoteur d'un gène connu.Peut on connaître la séquence ADN correspondante à ce enhancer Merci de me renseigner Impossible de le trouver Juju.  [...] Tu effectues des deletions sequencielles de la region 5' au promoteur des que tu perds l'activite promoter (identifie par un gene rapporteur tel que lacZ ou luc) c'est que tu as touche une region importante pour la stimulation du promoteur. (Ca permet aussi de trouve les eventuels represseurs aussi puisque si tu deletes le represseur alors le promoter deviens superactif).  [...]