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surproduction et purification de proteine

J'ai produit pendant ma thèse deux protéines du parasite Plasmodium chez E. coli (des top10). Voici ce que je peux partager comme idées.  [...] _ Pour les tampons à utiliser je préfère laisser la parole à qqn d'autre, j'ai produit de la protéine transmembranaire alors c'était très particulier je pense les tampons que j'ai utilisés.  [...]

monde ARN avant ADN

Pour explorer plus avant cette idée, Jonathan Filée a entrepris l'analyse phylogénétique systématique des protéines virales du métabolisme de l'ADN dans le cadre de sa thèse (dirigée par Jacqueline Laurent, une Maître de conférence dans notre équipe). Leur travail a confirmé l'existence de transferts anciens de protéines réplicatives entre cellules et virus (Filée et al.  [...] Pour concilier ma proposition initiale (une origine virale des protéines de réplication bactérienne) avec celle de Villareal et De Filippis, et avec les données sur l'évolution de la famille Topo IIA, j'ai proposé l'hypothèse radicale selon laquelle toutes les protéines de réplication seraient d'origine virale (Forterre, 2002, Forterre et al., 2003) (Figure 15).  [...]

Les nanodisques

Y a t-il quelqu'un qui aurait une idée sur la méthodologie pour insérer des protéines membranaires dans des nanodisques.  [...] Il faudrait aller toquer du côté de chez eux. http.//www.theses.fr/s98650 =. Les nanodisques comme outil pour l'étude de protéines membranaires intégrales (thèse).  [...]

Concentration...

Je suis en thèse dans un laboratoire de recherche. j'ai injecté un produit (à base de thiazine) à des rats par voie intrapéritonéale, et les résultats ont été intéressants à une certaine concentration (10mg/kg).  [...] En fait, le truc c'est que notre produit n'a jamais été utilisé per os jusque maintenant. Aucun article à ce sujet en tous cas. Du coup c'est l'inconnu.  [...]

Probème de smear sur gel d'électrophorèse de protéines

J'aurais besoin de votre aide pour comprendre un gel d'électrophorèse de protéines. Ce n'est pas ma manip mais celle d'une étudiant en thèse qui ne parle pas français et qui m'a demandé de l'aide.  [...] Ok, donc si vous êtes sûr que votre protéine d'intéret est bien produite. Les smears sont en géneral dûs á une mauvaise préparation d'un des deux gels (ou des deux) ou encore au dépot d'un volume trop grop de protéines dans les puits du gel.  [...]

[Génétique] analyse génique

je suis actuellement étudiant en thèse et je travail sur un cluster génique bactérien. J'ai déjà une bonne partie de la séquence avec les ORF et les protéines putatives. Cependant j'aimerai avoir une prédiction de la localisation des terminateur, stem loop, promoteurs.  [...] j'ai testé le site pour les promoteurs et c'est plutôt bien.Sinon je bosse sur les genes impliqués dans la biosynthèse d'une bacteriocines. Et effectivement il semble que le cluster est organisé en plusieurs unités transcriptionnelles, ce qui facilite pas la tache.  [...]

[Biologie Moléculaire] Connaitre séquence génomique....

Et tu fais une PCR sur tout tes produits de ligation. Normalement tu vas donc amplifier les régions flanquantes du fragment deja connu. Il ne te reste plus qu'a séquencer ces prodtuis de PCR identifier le site de coupure pour trouver la delimitation et le tour est joué.  [...] Tu amplifies ton ADNg une premiere fois, puis tu refais une pcr nichee sur ton produit pcr en utilisant l'oligo specifique de ton fragment d'ADN + l'oligo specifique de ton oligo degenere... Je ne sais pas si je suis tres clair... Un labo voisin de mon labo de these utilisait cette methode pour sequencer de l'ADN inconnu.  [...]

Antigène

Les protéines recombinantes ne sont donc pas extraite de la nature mais synthétisées en laboratoire. Pour te donner un exemple que j'ai expérimenté, moi en thèse je travaillais sur la protéine d'un parasite très pénible à cultiver. J'aurais jamais pu cultiver assez de parasites pour ensuite faire 50 étapes d'extraction/purification pour arriver à un excellent taux en ma protéine d'intérêt dans mon échantillon, et en quantités acceptables pour mes manips.  [...] Du coup, j'ai fait exprimer ma protéine d'intérêt à une bactérie (E. coli). elle se cultive très facilement et je peux lui faire produire ma protéine en très grande quantité. C'est ce qu'on appelle le clonage moléculaire. Grâce à la transgenèse. Après expression de la protéine, je dois la purifier pour me débarrasser de tout ce qui appartient à la bactérie et me retrouver avec un taux idéalement avoisinant 100% de ma protéine d'intérêt.  [...]

Lipides (et lactates) sur des efforts physiques ou sportifs - Page 2

correct, mais la distinction entre acide gras libre et acide gras non estérifié est variable. Un acide gras non estérifié est rarement libre dans le sens qu'il est lié à l'albumine, essentiellement (ou a d'autres protéines comme FABP dans le cytoplasme). Je me souviens de mon rapporteur de thèse qui m'avait repris la dessus, même si dans la définition la plus fréquente, acide gras libre = acide gras non estérifié.  [...] Il s'est passé qu'un célèbre physiologiste américain, M. BROOKS, avance depuis qqes années que l'acidité à l'effort n'est pas due à la glycolyse mais qu'elle serait due à l'hydrolyse de l'ATP, c'est à dire le catabolisme de l'ATP en ADP (restitution de l'énergie transportée, énergie utilisée pour la contraction musculaire, par les protéines contractiles).  [...]

Articles importants dans Nature, Science ou Cell - Page 3

We describe a hybrid statistical mechanical and dynamical approach for modelling the formation of closed, open and elongating complexes of RNA polymerase, the interactions of these polymerases to produce transcriptional interference, and the regulation of these processes by a DNA-binding and DNA-looping regulatory protein.  [...] For these proteins, the only residue that can be targeted is the N-terminal residue. Interestingly, p16(INK4a) is degraded in a cell density-dependent manner. Importantly, we provide for the first time direct evidence for N-terminal ubiquitination. Analysis of tryptic digest of the ubiquitin conjugate of HPV-58 E7 revealed a fusion peptide that is composed of the C-terminal domain of ubiquitin and the N-terminal domain of E7.  [...]