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surproduction et purification de proteine

J'ai produit pendant ma thèse deux protéines du parasite Plasmodium chez E. coli (des top10). Voici ce que je peux partager comme idées.  [...] _ Pour les tampons à utiliser je préfère laisser la parole à qqn d'autre, j'ai produit de la protéine transmembranaire alors c'était très particulier je pense les tampons que j'ai utilisés.  [...]

monde ARN avant ADN

L'histoire de l'hypothèse du monde à ARN commence avec la publication en 1967 d'un livre de Carl R. Woese intitulé The Genetic Code. The Molecular Basis for Gene Expression. Selon lui, en analysant la complexité de ce qu'on savait à l'époque de l'appareillage moléculaire impliqué dans la biosynthèse des protéines, l'ARN de transfert aurait précédé les molécules plus complexes comme les aminoacyl-tARN synthétases, ou le complexe ribonucléoprotéinique comme le ribosome.  [...] Pour explorer plus avant cette idée, Jonathan Filée a entrepris l'analyse phylogénétique systématique des protéines virales du métabolisme de l'ADN dans le cadre de sa thèse (dirigée par Jacqueline Laurent, une Maître de conférence dans notre équipe). Leur travail a confirmé l'existence de transferts anciens de protéines réplicatives entre cellules et virus (Filée et al.  [...]

Les nanodisques

Y a t-il quelqu'un qui aurait une idée sur la méthodologie pour insérer des protéines membranaires dans des nanodisques.  [...] Il faudrait aller toquer du côté de chez eux. http.//www.theses.fr/s98650 =. Les nanodisques comme outil pour l'étude de protéines membranaires intégrales (thèse).  [...]

Concentration...

Je suis en thèse dans un laboratoire de recherche. j'ai injecté un produit (à base de thiazine) à des rats par voie intrapéritonéale, et les résultats ont été intéressants à une certaine concentration (10mg/kg).  [...] En fait, le truc c'est que notre produit n'a jamais été utilisé per os jusque maintenant. Aucun article à ce sujet en tous cas. Du coup c'est l'inconnu.  [...]

Probème de smear sur gel d'électrophorèse de protéines

J'aurais besoin de votre aide pour comprendre un gel d'électrophorèse de protéines. Ce n'est pas ma manip mais celle d'une étudiant en thèse qui ne parle pas français et qui m'a demandé de l'aide.  [...] Ok, donc si vous êtes sûr que votre protéine d'intéret est bien produite. Les smears sont en géneral dûs á une mauvaise préparation d'un des deux gels (ou des deux) ou encore au dépot d'un volume trop grop de protéines dans les puits du gel.  [...]

[Génétique] analyse génique

je suis actuellement étudiant en thèse et je travail sur un cluster génique bactérien. J'ai déjà une bonne partie de la séquence avec les ORF et les protéines putatives. Cependant j'aimerai avoir une prédiction de la localisation des terminateur, stem loop, promoteurs.  [...] j'ai testé le site pour les promoteurs et c'est plutôt bien.Sinon je bosse sur les genes impliqués dans la biosynthèse d'une bacteriocines. Et effectivement il semble que le cluster est organisé en plusieurs unités transcriptionnelles, ce qui facilite pas la tache.  [...]

[Biologie Moléculaire] Connaitre séquence génomique....

Et tu fais une PCR sur tout tes produits de ligation. Normalement tu vas donc amplifier les régions flanquantes du fragment deja connu. Il ne te reste plus qu'a séquencer ces prodtuis de PCR identifier le site de coupure pour trouver la delimitation et le tour est joué.  [...] Tu amplifies ton ADNg une premiere fois, puis tu refais une pcr nichee sur ton produit pcr en utilisant l'oligo specifique de ton fragment d'ADN + l'oligo specifique de ton oligo degenere... Je ne sais pas si je suis tres clair... Un labo voisin de mon labo de these utilisait cette methode pour sequencer de l'ADN inconnu.  [...]

Antigène

Les protéines recombinantes ne sont donc pas extraite de la nature mais synthétisées en laboratoire. Pour te donner un exemple que j'ai expérimenté, moi en thèse je travaillais sur la protéine d'un parasite très pénible à cultiver. J'aurais jamais pu cultiver assez de parasites pour ensuite faire 50 étapes d'extraction/purification pour arriver à un excellent taux en ma protéine d'intérêt dans mon échantillon, et en quantités acceptables pour mes manips.  [...] Du coup, j'ai fait exprimer ma protéine d'intérêt à une bactérie (E. coli). elle se cultive très facilement et je peux lui faire produire ma protéine en très grande quantité. C'est ce qu'on appelle le clonage moléculaire. Grâce à la transgenèse. Après expression de la protéine, je dois la purifier pour me débarrasser de tout ce qui appartient à la bactérie et me retrouver avec un taux idéalement avoisinant 100% de ma protéine d'intérêt.  [...]

[Biochimie] méthode etude macromolécules

Comme tu le dis il s'agit d'une méthode pour suivre la purification des protéines c.a.d observer la quantité de protéines (par exemple) à un instant T. Cependant, il faut d'abord purifier les protéines par exemple en colonne d'exclusion par la taille (ou toutes autres méthodes) tu récolte au fur et à mesure dans des béchers puis direction cuve de spectro pour avoir une idée de la quantité (il y a ou pas et en quelle proportion).  [...] Pendant ma thèse, j'ai exprimé et purifié une protéine avec une forte affinité pour les ARN, donc des acides nucléiques. En début de manip, le pic d'absorption de mon échantillon se situait à 260 nm, ce qui correspond aux AN. Après 2 colonnes si je me souviens bien (une première Ni-NTA pour isoler ma protéine avec un tag histidine) puis une deuxième selon la charge, UnoQ il me semble, bref, mon pic se situait à 280 nm, ce qui témoignait de l'élimination des AN puisque ce pic d'absorption correspond aux protéines (260 VS 280 nm).  [...]

Le scénario de l'origine de la vie enfin déterminé ? - Page 5

Pour produire tous les composants du matériel cellulaire (glucides, lipides, acides nucléiques et protéines), ces composés sources des réactions organiques anaboliques subissent seulement 11 transformations chimiques différentes.  [...] Le travail présenté dans cette thèse propose une voie prébiotique d'obtention de lipides linéaires, en particulier d'acides n-carboxyliques à longues chaînes, qui pourraient être les lipides ayant permis d'isoler le proto-organisme de l'eau de mer.  [...]