• Forum - Produit, Protéine, Intérêt

[Biologie Cellulaire] Besoin d'aide dans l'identification d'une molécule !

Ca marche plutot bien pour les protéines qui interessent beaucoup de personnes dans le monde. Mais, des lors que tu t'interesses a une protéine un peu originale, pour laquelle peu d'anticorps ont ete produits, il n'est pas rare de trouver des anticorps peu specifiques, qui vont pouvoir se lier egalement a des proteines autres que celle qui nous interesse.  [...] Cela pourrait aussi être un produit de dégradation de ta protéine d'intérêt, qui contient l'épitope ciblé par ton anticorps primaire.  [...]

[Biochimie] Petite question sur le Western Blot

Une autre cellule traitée avec notre produit contient 1ug de notre protéine A d'interêt mais aussi, 3 ug de protéines B car notre composé a boosté la synthèse d'une protéine B.  [...] Quand j'aurai le résulat de mon WB, je me dirais que mon composé testé à diminué la synthèse de ma protéine A d'interêt...alors qu'en fait ce n'est pas le cas, le composé a favorisé la synthèse d'une autre protéine.  [...]

[Biotechnologie] baculovirus

Et petite qustion subsidiaire, qu'est ce qui différencie le système qui produit des particules virales contenant le gène d'interêt (ou vecteurs de thérapie génique) du système qui produit la protéine recombinante... Ou est ce que les 2 sont toujours produits Ou alors utilisent-ils un promoteur inductible.  [...] l'intérêt est donc la production de protéines par un système eucaryote, proche de celui des cellules humaines, les protéines subiront des modifications post-traductionnelles. Et en utilisant ce système, il n'ya pas de risque de contamination car le virus n'est pas pathogène pour l'homme.  [...]

[Biologie Moléculaire] Retard sur gel

En fait on s'assure de la nature de la protéine d'intérêt en étudiant les effets d'un anticorps dirigé contre cette protéine. (dans le cas bien sûr où on a des candidats).  [...] En effet, si le retard qu'on observe est bien spécifique a la protéine d'intérêt, l'incubation avec un anticorps dirigé contre peut avoir deux effets. soit le retard est décalé vers le haut (supershift) du a la taille du complexe, soit le retard disparaît, a cause de l'encombrement produit par l'anticorps dans l'interaction avec la sonde.  [...]

[Biotechnologie] Fabrication d'une protéine d'intérêt ?

étudiant en terminale S spécialité biologie/écologie, je suis en pleine révision de biologie pour mon bac à venir. Mais en relisant mon cours sur le génie génétique je n'arrive pas à comprendre comment on produit une protéine d'intérêt.  [...] Etiquettes, ce sont souvent des bouts de protéine qui fluoresce, on fait en sorte que notre ADN sera introduit juste après l'ADN correspondant à ces protéines, ainsi les deux protéines seront créées ensemble, et on sera sur que la construction fonctionne.  [...]

dégradation de protéine recombinante

Je rencontre actuellement un problème lors de l'expression et la purif d'une prot recombinante. j'utilise le vecteur d'esxpression pQE30 et je purifie sur colonne NI-NTA, mais voila lorsque que je charge le produit de ma purif sur gel SDS j'observe bien la protéine d'intérêt à la MM attendue mais également des bandes de MM plus basse.  [...] D'après ce que tu dis, le plus probable est que ta protéine soit partiellement dégradée par des protéases contaminantes. Dans le cas où ta protéine d'intérêt n'est pas une protéase, la meilleure chose à faire est de détruire ces protéases en ajoutant 2 mM de PMSF et 2 mM d'EDTA.  [...]

[Biotechnologie] Global Analysis of Protein Activities using proteome chips

Ils purifient ensuite la protéine d'intérêt (grâce à la séquence GST). Sur les 1152 protéines différentes produites en même temps par cette méthode, ils en sélectionne aléatoirement 60 pour les tester par WB (afin de vérifier l'expression de la protéine d'intérêt).  [...] Pourquoi pas Le métabolisme des lipides est (très) compliqué. savoir que telle protéine interagit avec telle lipide peut permettre d'améliorer la compréhension.  [...]

[Biologie Moléculaire] Diminution de pb lors de la PCR

Bonjour. Lors d'une technique de PCR, j'aimerais savoir comment est-il possible d'obtenir un produit PCR vraiment plus petit (environ la moitie), en terme de paire de base, que ma proteine d'interet initial J'ai eu beau chercher mais la seul explication que j'ai trouvé est que le temps d'élongation du brin par la polymérase n'est pas suffisament long et que celui-ci n'a pas eu le temps de bien répliquer l'ADN.  [...] Du coup, au final, vous observez mieux le petit fragment et que votre fragment d'intérêt. L'effet sera d'autant plus marqué que le petit fragment sera petit devant le grand fragment.  [...]

[Biochimie] Induction de protéines GST

Je tente depuis 3 mois maintenant de produire ma protéine d'intérêt qui se trouve dans le vecteur pGEX-6P-1 qui me permet normalement d'obtenir une protéine fusionnée à la GST. Ma première expérience a été fructueuse puisque j'ai pu induire avec de l'IPTG ma protéine fusionnée, jusque là tout va bien.  [...] Sinon une question se pose encore. Si je comprends bien vous n'avez réussi qu'une fois à produire votre protéine. Etes vous certaines que ce n'était pas un artéfact Il serait dommage de s'acharner alors qu'au fond ça n'a jamais vraiment fonctionné.  [...]

[Biologie Moléculaire] Expression de protéines grâce au pGEX. DH5alpha ou BL21?

Voilà, j'ai cloné une protéine d'intérêt dans un pGEX en vue de réaliser plusieurs manips qui nécessitent que je puisse produire puis fixer ma protéine d'intérêt sur un support. Peu importent les manip' ce qui m'intéresse ici c'est la production de mes protéines GST-prot.  [...] Pour mon clone je ne vais pas le jeter comme cela étant donné que j'ai déjà produits des versions tronquées de la protéine. Si a un moment donné le domaine vient à devenir intéressant (je pense qu'il s'agit d'un domaine servant à maintenir la conformation d'un autre domaine de la protéine) il pourra peut être refaire surface.  [...]