• Forum - Produit, Concentration, ADN

[Biologie Moléculaire] C'est quoi le COT ?

Note. Les points de la courbe représentent la concentration en ADN double brin en fonction du produit de la concentration totale en ADN (Co) par le temps d'incubation (t) dans des conditions déterminées.  [...] C 0.t, c'est le produit de la concentration C 0 de l'ADN et du temps t d'incubation. Ce n'est donc pas la courbe, mais ce qui est en abscisse sur le graphique.  [...]

Rôle des proto-oncogénes ?

Les telomeres sont tjs impliques dans l'immortalisation, que ce soit par re-activation de la telomerase (80-90%) ou par voie ALT (recombinaison, 10-20 %) et pourtant p53 est impliquee dans environ 50 % des cancers, ne vois-tu pas une contradiction avec ce que tu avances.   [...] 2. Production de radicaux libres (oxydatifs donc agressifs pour les macromolecules que sont l'ADN et les proteines). Notes que ces radicaux sont le produit normal du metabolisme cellulaire, cependant certains composes peuvent en abaisser la concentration (polyphenols du vin rouge etc).  [...]

[Biologie Moléculaire] optimisation dHPLC

J'utilise la dHPLC pour identifier des mutation sur les exon d'un gène. J'aurais aimé savoir sur quels facteurs il est possible d'intervenir pour diminuer les épaulements que j'obtiens lorsque je passe mon témoin (adn sans mutation) j'ai déja essayé de diminuer la concentration en MgCl2 lors de la PCR mais j'ai peur que si je la réduit encore je n'obtienne plus de produit PCR.  [...] Essaie peut-être de purifier ton produit de PCR sur colonne de kit avant Ou de travailler avec des enzymes proofreading pour éviter d'avoir des sous-produits mutés.  [...]

mix pcr

oui c'est vrai, j'ai essayé d'ajouter un mix à mon extrait de pcr et de relancer, il semble qu'une amplification a eu lieu cette fois ci, j'ai une concentration de 2600ng/µl et un rapport 260/280 de 1.6, cependant j'ai un doute est ce que c'est mon adn qui a été amplifier ou bien c le produit de mes propres amorces.  [...] Tu as probablement raison. Mais vu la concentration élevée, tu peux avant faire une migration du produit PCR sur gel (d'agarose), afin de confirmer la taille (seulement si la taille de ton fragment amplifié est bien supérieur à celle de tes amorces - 5/10 fois minimum).  [...]

[Biologie Moléculaire] Calcul de rendement

Sachant que Rendement = (Concentration après purification) / (concentration avant purification), il me manque donc la concentration avant. On connait la concentration d'ADN (donc celle du plasmide) présente initialement. Cependant, pour connaitre celle des fragments présents (donc l'extrémté 5', après digestion) j'essaye cette formule. (Concentration ADN * (784/5484)). Donc.  [...] Je profite de topic pour vous demander autre chose. Je dois aussi réalisé une PCR. J'ai lu mon cours, le topic dessus sur Futura, mais je me demande quelque chose. Je dois faire un génotypage de plante, et je ne connais pas la concentration en ADN (donc en matrice).  [...]

[Biologie Moléculaire] Concentration ADN plus élevé au picogreen qu'aux UV (spectrométrie)

Ce sont des échantillons d'ADN humain provenant de Buffy Coat (couche de cellules blanches du sang). Je prends 4 ul d'ADN que je dilue dans 196 ul de TE 1X (donc une dilution 1.50). Je lis ensuite la plaque dans le lecteur absorbance (UV) ce qui me permet de déterminer la concentration ainsi que la pureté.  [...] Lorsque je compare les concentration de mes ADNs mesurées avec les deux technologies, alors qu'on devrait s'attendre à avoir une concentration plus élevée avec le UV c'est plutôt le contraire qui se produit et ce avec tous les échantillons (peu importe la provenance du client) que j'analyse.  [...]

[Biologie Moléculaire] pb migration ADNg sur gel

L'extraction se fait à l'aide du TriReagent. Pour le dosage (20µL d'ADN + 980µL d'eau stérile dans la cuve du spectro), j'obtiens des valeurs de DO de 0,105 pour prendre l'exemple sur un tube. Ce qui me donne une concentration de 262,5 µg/mL d'ADN. Or je dépose ensuite dans le puit d'un gel d'agarose 0,8% environ 10µL d'ADN+4µL de bleu de charge.  [...] Dans le cadre d'un projet, nous avons extrait de l'ADN d'un sol avec un kit d'extraction puis nous avons amplifier un gène spécifique à l'aide d'une PCR et enfin nous avons fait migrer les produits de PCR sur gel d'agarose avec plusieurs concentrations.  [...]

[Génétique] pb clonage moléculaire

Traitement de l'ADN linéarisé du plasmide vecteur avec la phosphatase alcaline qui enlève les groupes 5' phosphate terminaux évité la recirculation du vecteur et la formation de dimères de plasmide. Après ce traitement, on puisse donc ajouté l'insert.  [...] Les cellules de Ecoli et l'ADN plasmidique interagissent de façon productive en présence d'ions calcium et à base Température (o-5°C).  [...]

Variation de la concentration d'ADN dans les tubes de plastique?

Allo, j'ai un problème à résoudre. Je fais des expérience sur des tubes en polypropylène pour l'entreposage de l'ADN génomique à 4°C et j'ai remarqué que dans le temps la concentration de mon ADN varient. Lorsque mes tubes ont été préalablement autoclavé, j'ai une perte que a de 20 à 50% de la contration de mon ADN.  [...] J'ai déjà essayé une marque de tube supposément low binding, mais la concentration de mon ADN dans ses tubes varie quand même. Est-ce que tu aurais des suggestions de fournisseurs à me proposer.  [...]

[Biochimie] estimation de le concentration d'ADN aprés spectrophotometrie

Bonsoir, au cours de mon stage à la faculté, j'ai fais des extractions d'ADN à partir de sang humain, et aujourd'hui j'ai dosé mes echantillon par spectrophotometrie (ADN dilué au 1/100 dans du TE). Je voudrais calculer la concentration de mon ADN dans chaque echantillon, comment puis je faire à part la regle de. 1 DO correspond à 50 µg/ml.  [...] Je voudrais appliquer la formule de yumyum (plus haut) sur 2 µl d'ADN dilué dans 998µl d'eau distillé (le tout donne 1000µl), comment doit-je appliquer la règle précédemment cité si je veux trouver la concentration de ma solution en ADN.  [...]