• Forum - Problèmes, Restrictions, Séquence

[Biologie Cellulaire] Utilisation de l'ADNc

C'est peut etre bete mais j'arrive vraiment pas a comprendre en quoi le fait qu'il n'y ai pas d'introns et dc avoir des sequences plus courtes est avantageux. Car dans meme si on a recours a l'ADNc pour etudier par exemple un gene ou pour l'obtention d'une proteine avec replication/trans/trad dans tout les cas les introns seront supprimés.  [...] Moins de problèmes de PCR, moins de problèmes pour les intégrer dans des plasmides, moins de problèmes pour la transfection (plus le plasmide est gros, moins la transfection est efficace), moins de problèmes pour choisir des enzymes de restrictions qui ne coupent pas à l'intérieur de notre séquence d'intérêt, et j'en passe.  [...]

[Biochimie] Rechercher sites de restriction

Déjà connais-tu des programmes online permettant de trouver les sites des enzymes de restriction connues sur une séquence donnée Quelle peut être l'utilité du programme que tu décris, s'il existe (ce qui m'étonnerait beaucoup).  [...] J'ai trouvé le programme dans lequel j'entre une sequence et je choisis une enzyme puis je récupère ma sequence avec des espaces aux niveau des sites de restrictions correspondant a l'enzyme choisie.  [...]

[Biologie Moléculaire] logiciel clonage

connaissez-vous un logiciel permettant d'ajouter des sites de restrictions sur une séquence un logiciel de préférences gratuit.  [...] En effet, certains appellent cela le clamp et il permet d' internaliser le site de restriction. En effet, les enzymes de restrictions sont des endonucléases si bien que leur site de coupure doit être à l'intérieur d'une séquence ADN, et non en bordure.  [...]

Déchiffrage d'une carte de plasmide

Les 2 lignes au dessus du plasmide correspondent aux différents sites de restrictions (éventuellement pour cloner une séquence dans ces poly-linker).  [...] Juste avant les sites de restriction tu as bien sûr un promoteur pour initier la transcription de ta séquence (Pcmv). Les séquences Ori sont les origines de réplication du plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

vous pouvez utilisez 2 enzymes de restrictions aussi..mais cette fois vous allez remplacer une séquence du vecteur (elle va être coupée par 2 enzymes différents, chaqu'un d'un coté )par votre séquence d'ADN (qui va être aussi coupée par lé deux)...P.  [...] J'ai moi aussi de la difficulté a trouver un vecteur approprié, Et Je ne comprend pas pourquoi le bon vecteur dans cet exemple serait PinPoint xa-1 Selon ce que j'ai vu il ne possede pas de sites de restriction communs avec la sequence d'ADNc dans sa region du gene de resistance Je ne comprend pas d'ailleurs pk le site de restriction doit se trouver dans la sequence de resistance a l'antibiotique et non ailleurs dans le plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Identification d'un gène déterminé

j'imagine qu'il faut découpé ce gène dans la bactérie 1, à l'aide d'enzyme de restriction, puis dans le PCR ajoutez ajouté des. ddatp, ddttp, ddctp, ddgtp fluorescent afin de pouvoir avoir une séquence de ce gène contenue dans la bactérie 2, si la bactérie 2 à ce gène.  [...] On veut vérifier si cette séquence se trouve dans ADN 2 donc, il faut que cette séquence soit le primer de l'ADN 2 lors du PCR à l'aide d'enzyme de restriction on va découper ce qu'il y'a autour pour n'avoir que la séquence ( je ne sais pas si il existe des enzymes de restrictions qui peuvent découper cette suite, mais là ce n'est qu'un exemple).  [...]

Dénaturation de l'adn en pH acides

Certaines enzymes de restrictions ont des fréquences de coupures plus grandes suivant la complexité de la séquence reconnue.  [...] heu... ben southern blot c'est le nom de la methode. Le principe de la methode est d'hybrider une sequence d'ADN connue sur un pannel de sequence d'ADN inconnues (banque d'ADN, ADNg coupé par des enzymes de restriction, etc...) pour mettre en evidence la presence ou l'absence de la sequence connue.  [...]

Clonage orienté

Je suis bloquée, j'ai un peu de mal avec les enzymes de restrictions et je comprend pas tout à fait ce que l'on me demande. Sachant que l'on veut un clonage orienté, on me demande de choisir les enzymes de restrictions utilisable du côté de la bordure portant la séquence du promoteur T7 sachant que le fragment d'intérêt contient un site SacII.  [...] Après PCR, il faut digérer l'insert d'une part, et le plasmide d'autre part. Ces digestions vont permettent de générer des bouts cohésifs entre l'insert et le plasmide. Il suffit alors de choisir deux enzymes de restriction (peu importe lesquelles a priori).  [...]

[Biologie Moléculaire] Primers

les primers sont utilisés dans la majeure partie des techniques in-vitro nécessitant des polymérases, en particulier pour toutes les techniques de PCR. Comme tu le sais surement, pour dupliquer l'ADN (ou l'ARN dans certains cas), la polymérase à besoin d'une amorce, une petite séquence de nucléotides fixée au brin a répliquer, sur laquelle la polymérase va pouvoir prendre appui, ce sera le role des primers.  [...] Les primers peuvent aussi être crées de manières à ajouter des séquences de restrictions de chaque coté de la séquence amplifiée, lui permettant de l'introduire par après dans un plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Programme de clonage

Par exemple, tu veux faire un cloner une séquence que tu vas amplifier par PCR avec des sites de restrictions dans les primers pour l'insérer dans le vecteur cible.  [...] En principe (si je n'ai rien oublié) toutes les fonctions sont accessibles dans le menu général (sous les chapitres Serial Cloner, File, Edit, Sequence, Features, Restriction, Function, Window). Les plus fréquentes sont en plus disponibles en menu contextuel, en raccourci clavier et dans la barre d'outils.  [...]