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Mise en évidence d'un alcaloïde du chocolat

Bonjour, est-il possible de mettre en évidence, par une expérience relativement simple (réalisable dans un lycée), la présence d'un alcaloïde du chocolat, comme la théobromine ou la caféine par exemple J'ai vu sur Wikipédia que la caractérisation de la présence d'alcaloïde peut se faire par précipitation à l'aide de plusieurs réactifs ou de solutions contenant des ions potassium, mais cela pourrait-il être réalisable dans un lycée d'après vous La chromatographie est aussi évoquée sur Wikipédia. Merci de votre aide.  [...] Pourquoi pas, mais les quantités sont faibles, il faut une technique assez sensible.   [...]

extraction d'Adn

je voudrais savoir à quoi cela sert l'étape où l'on ajoute de l' acétate de potassium au broyat de tissu,(préalablement incubé à 65°C avec tampon de lyse et proteinase K )et que qu'on laisse incuber dans de la glace.  [...] L'acétate de sodium permet de tamponner la solution, neutraliser les phosphates et cela aide également à la précipitation de l'ADN (en ajoutant un alcool comme l'isopropanol).  [...]

[Biologie Moléculaire] Questions de Biologie moléculaire

3* En ce qui concerne la visualisation de l'ADN je connais la coloration au bromure d'éthidium qui se fixe à l'ADN double brin et devient fluorescent lorsqu'il est exposé aux rayonnements UV.   [...] 4*La précipitation des acides nucléiques peut se faire à l'aide de l'éthanol ou l'isopropanol, la différence réside dans le fait que la méthode à l'éthanol nécessite la présence de sel et la précipitation se réalise par addition de deux volumes d'éthanol à un volume de la solution, alors que la méthode à l'isopropanol ne nécessite pas la présence de sel et la précipitation se fait par un mélange volume à volume.  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN insoluble ??

Au moment de reprendre mes ARN dans l'eau, ceux issus des hépatocytes transfectés (Adénovirus et siRNA avec un transfectant, le PEI ) restent totalement insolubles dans l'eau, alors que les autres sont repassés en solution aisément.  [...] j'ai dosé mon surnageant, autant dire que c'est de la flotte. LE problème est que pour se débarasser de ce NaCl, il va falloir y aller. Je tente une réextraction, j'ai réussi a reprécipiter quelque chose, reste a voir si c'est plus soluble qu'avant.  [...]

[Biologie Moléculaire] Alcool isoamylique

L'isoporopanol peut effectivemet être remplacé par l'éthanol, mais à 100%et non 70%. L'avantage de l'isopropanol par rapport à l'Ethanol est de pouvoir deshydrater l'ADN avec un volume moindre d'alcool. C'est pour cela que lors d'une précipitation à l'éthanol on rajoute 2 volumes d'Ethanol 100% pour 1 volume de solution contenant l'ADN (ce qui donne 70% env.  [...] Dans ce cas le culot est étalé sur le tube, et pas vraiment visible. Un moyen d'aider, et d'ajouter du glycogen au moment de la précipitation, qui sert de carrier pour l'ADN et aide à visualiser le culot.  [...]

Précipitation protéines au sulfate d'ammonium

Ma protéine a été exprimée chez S. cerevisiae. Les cellules vont être lysées mécaniquement. Puis une première étape de précipitation va être réalisée à l'aide du sulfate de protamine (stock à 3% w/v pour être à 0,07% final) pour je suppose éliminer les acides nucléiques,  [...] Pour la précipitation, tout dépend du volume que tu veux extraire, des eppendorfs 1.5 ml/2ml ou des tubes falcons sur tu as des volumes plus importants.  [...]

[Biochimie] Améliorer la quantité, qualité et pureté d'une extraction d'ARN

J'ai effectué une extraction d'ARN à partir des cellules THP-1 humaines par deux techniques différentes. la technique d'extraction par précipitation en utilisant le trizol et la technique par extraction par colonne utilisant le kit direct-zol ARN miniprep et des colonnes appel zymo-Spin IIC.  [...] Pour la méthode de précipitation on a centrifugé les cellules pour avoir un culot des cellules. Ce culot a été disperser au maximum à l'aide d'un vortex. Le trizol a été ajouté sous une haute chimique à température pièce, on a vortexé pour homogénéiser, les étapes subséquentes ont été effectuées à température pièce jusqu'à l'ajout d'isopropanol où une incubation dans la glace de 10 minutes a été effectuée.  [...]

[Biochimie] extraction protéine d'une huile ou d'une cire pour quantification

Une autre de mes pistes est la précipitation au sulfate d'ammonium, mais en quel pourcentage de saturation pour avoir une précipitation totale et dans quel type de solution tampon pour également solubiliser mon huile ou ma cire.  [...] Après centrifugation (quelles sont les paramètres optimums pour former le culot) je suppose devoir faire une dialyse pour supprimer cette forte quantité de sel dans ma solution. pouvez vous me conseiller du matériel ou autre je n'en ai jamais réalisé.  [...]

[Biochimie] Protocole de purification d'une protéine, vos avis

JE NE SAIS PAS SI A CETTE ÉTAPE LES RIBOSOMES SONT ILS PRESENT DANS LA SOLUTION PROTEIQUE APRES PRECIPITATION AU SULFATE D'AMMONIUM.  [...] à éliminer le sulfate d'ammonium de la précipitation. Si la concentration en sel est trop élevée, la protéine ne s'accrochera pas à l'échangeuse d'ions.  [...]

[Biochimie] Activité enzymatique

Donc tu fais une precipitation au Sulfate d'ammo, c'est quoi en détail ton protocole Peux tu doser la quantité de protéine avant et après precipitation Tes conditions expérimentales de mesure de cinétique sont elles identiques avant et après précipitation.  [...] Si cela se trouve vous êtes au seuil de sa précipitation et seulement une partie cristallise alors que le reste est encore en solution.  [...]