• Forum - Précipitation, Acides, Alcool

[Biologie Moléculaire] Biotinylation et colonnes

Pensez-vous qu'il est possible de simplifier ces étapes de purification Par exemple faire directement un gel à la sortie de la PCR (ma bande est à 800bp).   [...] Pensez-vous que le fait que mes amplicons soient biotinylés empêche l'utilisation de kits de purification d'ADN (par exemple le NucleoSpin Extract II).   [...]

[Biochimie] Précipitation des protéines après fractionnement sur gradient de sucrose

Ma question est. quelle est selon vous le type de précipitation le plus adapté pour ce type de manipe Est ce que quelqu'un a déjà eu besoin de procéder à ce genre de précipitation.  [...] Pour ceux que cela intéresse (s'il y en a), la précipitation chlorforme/méthanol a bien fonctionnée, et est apparament la meilleure pour un gradient de sucrose.  [...]

[Biologie Moléculaire] solubilité ADN, ARN dans le phénol

En revanche, pour l'extraction d'ADN avec du phénol basique, c'est pas vraiment clair. Des sites comme http.//www.chups.jussieu.fr/polys/bi...Y.Chp.7.3.html disent que l'ARN et l'ADN sont en phase aqueuse (mais dans ce cas, qu'est ce qui élimine l'arn) mais sinon, implicitement, on pense que l'ARN est dans la phase organique (d'où la purification différentiel des acides nucléiques en fonction du pH).  [...] merci de ces réponses. Une question en entrainant une autre. la méthode classique de purification d'adn est. lyse cellulaire (sds, PK) suivi de phénol/chlo et précipitation alcoolique (isoprop ou ethanol). Nulle part est fait mention d'une étape RNAse, DNAse free. Est ce que.  [...]

Precipitation adn plasmidique

La precipitation peut meme se faire a temperature ambiante (la tp° n'influence pas la precipitation contrairement a certaine croyance).  [...] Effectivement ca n'influence pas la précipitation. Je pense que ces croyances sont basées sur le fait que lorsqu'on congèle a -20°C, on obtient une sorte de précipité visible à l'oeil nu.  [...]

[Biologie Moléculaire] Nettoyage d'ARNs & Transfert de protéines

1) J'ai des ARNs que je voudrait nettoyer. La DO 260/280 est bonne (. 2) mais je suis apparemment contaminé par les sels du tampon RLT (extraction sur colonne) puisque ma DO 260/230 n'est que de 1,3. Est-ce que vous pensez que ça peut poser un problème pour les envoyer en Q-RT-PCR Et si oui, pour éliminer ces sels, est-ce qu'une simple précipitation à l'isopropanol (+lavages à l'EtOH) suffirait.  [...] J'utilise le kit RNeasy Mini. Il est prévu pour extraire les ARNs à la base mais on peut aussi récupérer les protéines dans le tampon RTL. Il suffit juste de faire une précipitation à l'acétone.  [...]

précipitation des protéines

que veut dire la précipitation des protéines et que veut dire la demi saturation des protéines car on dit que les globulines précipitent à 50% de saturation et l'albumine à +de 50% de concentration dans le sulfate d'ammonium. Que cela veut il dire.  [...] en fait la précipitation des protéines arrive lorsqu'il y a une faible solubilité de la protéine dans la solution. En concentration faible de sels dissouts dans la solution, (donc faible force ionique) les sels interagissent avec les radicaux des protéines et aident à leur dissolution, or qu'en forte concentration saline, tout change, en effet, il n'y a plus assez de éluant (pris par les sels) donc les protéines se regroupent, on dit qu'elles précipitent (relargage).  [...]

extraction et séparations des composants d'une membrane

L'idée d'une précipitation des protéines a par contre l'air interessante je vais essayer de creuser dans cette voie la, couplée à une solubilisations des lipides ca pourrait donner des résultats interressants mais je ne suis vraiment pas expert dans ce domaine et je ne dispose que du labo du lycée.  [...] Ou alors il faudrait trouver un solvant apolaire qui solubilise la protéine hydrophobe et les lipides puis faire une précipitation défférentielle (mais jamais entendu parler... j'ai pas beaucoup d'expérience non plus...).  [...]

Problème de migration SDS-PAGE

L'expérience consiste, dans un premier temps, à dénaturer les protéines dans de l'urée 8M + DTT 5mM, puis à les renaturer par l'utilisation d'un tampon (TrisHcl, NaCl et EDTA), une centrifugation est ensuite réalisée, le surnageant correpondant à ma fraction soluble est concentrée par evaporation et mon culot correspondant à ma fraction agrégée est resuspendu dans un peu de tampon de dénaturation (Urée 8M + DTT 5mM) et Laemmli Buffer 5X.   [...] Je fais migrer mes fractions sur un gel SDS-PAGE 15%, la migration ne migre pas droite par rappport à mon marqueur de taille, j'ai des trop grosse bande (non du à la quantité de protéine déposée) qui déborde c'est assez bizzarre auriez-vous une solution à mon soucis.   [...]

Cancer

Toutes les masses ne sont pas des cancers, certes. Mais un seul mot d'ordre. faites contrôler. palpation, radio, échographie ou scanner, c'est selon. Si l'image est suspect, faites faire des analyses complémentaires et consulter un spécialiste. Certains cancers sont hormonaux dépendant, d'autres pas.   [...] Ne faites pas opérer sans l'avis d'un spécialiste. Un chirurgien pourrait ne pas demander les bonnes analyses de la pièce enlevée s'il s'aventurait par précaution... mais qui dans ce cas s'apparenterait à une précipitation.  [...]

[Microbiologie] Mise en évidence système SOS bactéries

Le système SOS fonctionne lorsque LexA, le répresseur des gènes impliqués, est détruit par fixation à la recombinase A et à l'ADN. Cela permet donc d'activer les gènes SOS et de former des protéines umuD (qui subit une maturation par recA) et umuC qui s'associent et permettent la réplication fautive (avec l'aide de recA).   [...] Sinon, pour les anti-oxydants. si j'ai bien compris, ils détruisent l'ADN -. radicaux libres que l'on peut mettre en évidence (par précipitation grâce à je-ne-sais-quoi, comme lorsque le code génétique a été établi par exemple... C'est ça ).  [...]