• Forum - Précipitation, Acides, Alcool

[Biologie Moléculaire] Solution Q du kit Qiagen

effectivement Marie_Eve a raison. il ne faut pas oublier la précipitation des acides nucléiques avec de l'alcool (à 70 % je crois). Mea Culpa.  [...] -les tampons RLT et RW1 contiennent du guanidium isothiocyanate. C'est un sel chaotropique qui en milieu acide et alcoolique attire les molécules d'eau permettant une réaction d'adsorption des acides nucléiques sur la silice. Ici, les particules de silice sont disposées sur colonne et la séparation s'effectue par centrifugation.  [...]

[Biologie Moléculaire] analyses des acides nucléique

Dans la glace avec la solution E. comme je l'ai dit, le SDS précipite au froid. De meme éventuellement,comme on est en présence de sels, les protéines aussi, ainsi que les longs acides nucléiques (comme l'ADN génomique). Les plasmides restent en suspension.  [...] Isopropanol à -20°C. ca fait partie du mythe, la précipitation des acidse nucléiques se faisant tradtionnellement en froid dans un alcool. S'il y a suffisement d'ADN, la précipitation se fait tres bien à température ambiante aussi.  [...]

[Biologie Moléculaire] Précipitation d'ADN

je n'ai jamais entendu parler d'une précipitation mais je peux t aider par le faite d'utiliser l'ethanol est indispensable pour précipiter l'ADN car ce dernier est insoluble dans l'alcool de Moncef.  [...] Tout a fait exacte, je crois qu'historiquement c'est parceque l'alcool deviens plus visqueux a basse température. mais ca ne change rien pour l'efficacité de précipitation.  [...]

[Identification] Extraction d'ADN

Je pense que ce n'est pas le mélange NaCl/détergent qui permet cette précipitation d'ADN. L'ADN,tout seul, précipite dans l'alcool.  [...] L'alcool sert effectivement à précipiter l'ADN mais ceci est potentialisé par les sels tels que le NaCl qui vont permettre de liberer l'ADN de protéines qui y sont fixées.  [...]

extraction d'Adn

je voudrais savoir à quoi cela sert l'étape où l'on ajoute de l' acétate de potassium au broyat de tissu,(préalablement incubé à 65°C avec tampon de lyse et proteinase K )et que qu'on laisse incuber dans de la glace.   [...] L'acétate de sodium permet de tamponner la solution, neutraliser les phosphates et cela aide également à la précipitation de l'ADN (en ajoutant un alcool comme l'isopropanol).  [...]

[Biologie Moléculaire] protocole extraction ARN (pas de kit, ni trizol)

Essaye un protocole d'extraction d'ADN classique, lyse avec un détergeant, puis précipitation a l'alcool. Si tu manipules proprement alors tu auras de l'ADN et de l'ARN.  [...] J'ai fait des extractions d'ARN dans ma jeunesse avec du phénol Chloroforme-alcool isoamylique mélange 1/1 et ça marchait très bien. Problème c'est long, assez lourd et les quantités récupérées sont certes impressionnantes mais pas reproductibles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Biotinylation et colonnes

Pensez-vous qu'il est possible de simplifier ces étapes de purification Par exemple faire directement un gel à la sortie de la PCR (ma bande est à 800bp).   [...] Pensez-vous que le fait que mes amplicons soient biotinylés empêche l'utilisation de kits de purification d'ADN (par exemple le NucleoSpin Extract II).   [...]

[Biologie Moléculaire] Questions de Biologie moléculaire

3* En ce qui concerne la visualisation de l'ADN je connais la coloration au bromure d'éthidium qui se fixe à l'ADN double brin et devient fluorescent lorsqu'il est exposé aux rayonnements UV.   [...] 4*La précipitation des acides nucléiques peut se faire à l'aide de l'éthanol ou l'isopropanol, la différence réside dans le fait que la méthode à l'éthanol nécessite la présence de sel et la précipitation se réalise par addition de deux volumes d'éthanol à un volume de la solution, alors que la méthode à l'isopropanol ne nécessite pas la présence de sel et la précipitation se fait par un mélange volume à volume.  [...]

Biochimie : Pourquoi a-t'on besoin d'éthanol pour extraire le fructose du citron?

Le sel permet de neutraliser les charges négatives (portées par les groupements phosphates) de l'ADN en éliminant les molécules d'H2O qui entoure la double hélice. Cela permettra ainsi sa précipitation dans l'alcool.  [...] Ethanol is much less polar than water. its dielectric constant is 24.3 (at 25 °C). This means that adding ethanol to solution disrupts the screening of charges by water. If enough ethanol is added, the electrical attraction between phosphate groups and any positive ions present in solution becomes strong enough to form stable ionic bonds and DNA precipitation.  [...]

Précipitation protéines au sulfate d'ammonium

Ma protéine a été exprimée chez S. cerevisiae. Les cellules vont être lysées mécaniquement. Puis une première étape de précipitation va être réalisée à l'aide du sulfate de protamine (stock à 3% w/v pour être à 0,07% final) pour je suppose éliminer les acides nucléiques,  [...] Pour la précipitation, tout dépend du volume que tu veux extraire, des eppendorfs 1.5 ml/2ml ou des tubes falcons sur tu as des volumes plus importants.  [...]