• Forum - Précautions, Préparation, ADN

[Biologie Moléculaire] Précaution pour etude méthylation ADN

je vais devoir faire une étude de la méthylation d'une region, surement par traitement bisulfite et sequencage et j'aurais aimé savoir s'il y avait des précautions à prendre pour la préparation des ADN.  [...] Merci pour vos réponses, c'est ce que je fais tout le temps avec mes ADN donc çà devrait aller. Je pensais qu'il y avait peut être des techniques d'extraction, ou de précipitation particulière.  [...]

Préparation solution enzymatiques (quel protocole et précautions?)

J'ai des solutions enzymatiques à préparer à partir d'enzymes lyophilisées. Je me demandais quelles préautions il faut prendre vu la fragilité de ces molécules. Travailler sur glace Peut on vortexer sans risque pour bien dissoudre la poudre Merci.   [...] Elles sont souvent livrées avec un petit mode d'emploi décrivant leur mode de conservation ainsi que d'utilisation. Toujours bien de les lire ces petits trucs.   [...]

[Biologie Cellulaire] réactif de london ?

Je dois en préparer mais je ne sais pas la composition de ce réactif ainsi que les précautions de préparation.  [...] Après plusieurs conversations que j'ai eu avec des pros, voilà la composition du réactif de London (pour ceux qui, un jour, chercheront comme moi).   [...]

Maladie de Crohn et RCH - Page 218

Dimanche je bois 2 l de fortan (sans manger), lundi clinique (à lorient) pour boire les 2 autres (sans manger), mardi colo pour vérifier que mon colon est sain avant l'opération du grêle (sans manger). C'est la première fois qu'ils me font boire ma préparation avec autant de précautions.  [...] Ce qui commence à me turlupiner c'est l'approche de la date de l'opération. Mes 2 filles (une de 7 at l'autre de 14 ans) me posent beaucoup de questions, plus sur la séparation car elles ne pourront pas me voir tout de suite. En effet, nantes est à 2h et il y l'école.   [...]

Clonage de dinos ?

En effet au cours de ces manipalutions bcp de précautions sont prise pour éviter les contaminations cependant l'ADn est très fragil et fragmenté et les contaminations sont d'autant plus probable. Donc pouvoir amplifié de l'ADN nucléaire et en déterminer la sséquence complète semble être une entreprise très très difficile.  [...] A ma connaissance, il n'y a pas eu de decouverte scientifique qui n'aurait pas pu etre appliquee par principe de precaution, puisque generalement un scientifique passionne par son sujet se donnera toujours les moyens de mener a bien son projet, par des moyens X ou Y parfois detournes.  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

.. mais à mon avis le gros problème avec l'extraction d'ADN à la maison c'est les contaminations. Chez nous, malgré les précautions prises, ce n'est pas du tout rare alors dans une cuisine.  [...] Une PCR classique (20-30 cycles) dans ce cas là doit prendre environ 2min par cycle, donc 1H-1H30 de temps de PCR, plus 30min de préparation. Idem pour la migration. Je tombe à 23H en étant le plus rapide possible, et avec une nuit d'attente.  [...]

[Génétique] Southern Blot et gel d'acrylamide

Au contraire, l'acrylamide a même l'avantgae sur l'agarose, que çe soit pour l'ARN (northern) ou l'ADN (southern) mais vu les précautions à prendre en travaillant avec (notamment sa toxicité et sa fragilité), on utilise plus l'agarose.  [...] Oui, mais ici c'est un high resolution southern, c'est un cas bien precis. Dans cet article les fragments les plus gros sont a 700 pb... generalement une digestion d'ADNg donne des fragments plus gros.   [...]

[Génétique] PCR ou RT-PCR

Je l'avoue, mes extractions se sont toujours réalisées sur matrice complexe (selles humaines et joyeusetés dans le genre), mais même en culture pure pour la mise au point, j'ai remarqué de belles différences dans les concentrations obtenues, c'est pourquoi je lui recommandais de prendre plus de précautions qu'une simple extraction d'ADN (et une centri réfrigérée, c'est plus chère qu'une centri non réfrigérée aux dernières nouvelles, et il y a encore des labo qui n'en ont pas).  [...] Et Avec vos réponses je pense que je vais opter pour la RT-PCR, parceque comme vous me l'avez précisé la PCR toute seule ne va pas prouver que le gène est actif (si tjs gène il y a), à la base du projet son activité devait être prouvée par d'autre manips mais en fin de compte si les 2 techniques aux niveaux financiers ne sont pas fort différentes, et que tout compte fait les manipulations sont en générales toutes les deux assez efficaces, les informations de la RT-PCR seront complémentaires et toujours la bienvenue.   [...]

Traitements des données en QPCR

Je fais actuellement de la QPCR après une technique de ChIP (chromatin immunoprecipitation) et je me pose quelques questions sur le traitement de mes données. Je dois en effet comparer l'échantillon sans anticorps (ou normalement il ne doit pas y avoir d'ADN) avec l'échantillon d'ADN immunoprécipité.  [...] De plus quelles précautions dois-je prendre pour pouvoir comparer la quantité d'ADN entre mes deux lignées cellulaires, car j'imagine que je ne vais pas avoir les mêmes valeurs sur mon gène de référence. Dans ce cas, dois-je normaliser en plus sur le gène de référence Le problème est que si je fais deux rapports successifs (en divisant par sans Ac et par le gène de référence) mes barres d'erreur risquent de devenir tellement grandes que mes résultats ne voudront plus rien dire.  [...]

[Biologie Moléculaire] pb migration ADNg sur gel

En ce qui concerne les ARN, dans le labo où je suis on prend mille et une précautions pour arriver à les isoler...(utiliser des tubes et cones stériles, traités à l'eau DEPC puis rincés à l'éthanol puis encore à l'eau, ou un kit de purif d'ARN utilisant du mercaptoéthanol pour inactiver les RNases), précautions que je ne prends pas pour l'ADNg, je pense qu'il y a peu de chances que j'isole de l'ARN total et que ce soit cela que je dose.  [...] La dans tes echantillons tu as doses ton ARN+ADN. Comme tu ne prend aucune precaution particuliere pour isoler l'ADN, ton ARN est +/- degrade.  [...]