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cellules souches

Le FACS (=fluorescence activated cell sorting). c'est une méthode de tri cellulaire. Tu marque une population de cellule avec des sondes fluorescentes spécifiques de ce que tu cherche à étudier. Cette population de cellules tu la passe dans une machine dont le principe est assez simple.  [...] Le Hoechst (comme le DAPI) ets un intercalant du DNA (=ADN si c'était ta question) donc si la cellule souche garde toujours les 2 mêmes brins, le marquage va rester au fur et à mesure des divisions de la cellule.  [...]

[Biologie Moléculaire] Internalisation / FRET

a priori, il suffit de marquer chacun des deux types cellulaires avec une sonde fluo, la gfp est ok mais c'est bien compliqué, une incubation avec une sonde lipophile fluo (type PKH67) ou avec une sonde AM suffit largement et ça prend 3O min.  [...] Les sondes étant lipophiles elles vont marquer tout l'intérieur de la cellule, et si il y a un phénomène d'internalisation alors je vais avoir une fluorescence jaune que je peux detecter par cytométrie de flux. Ai je bien compris.  [...]

Technique d'imagerie confocale avec des sondes ratiométriques

Je suis étudiante en M1 et j'ai régulièrement des analyses d'article à faire et cette semaine je suis entrain d'étudier l'article de Clark sur le TRPM7 paru dans the EMBO journal en 2006 et pour leur première expérience il mesure les quantités de calcium dans la cellule à l'aide de deux sondes calciques (oregon green et fura red) mais j'ai du mal à comprendre l'intérêt des deux sondes il doit y avoir une sorte de qualibrage fait mais je n'en sais pas vraiment plus surtout que je n'arrive pas à trouver les longueurs d'onde d'excitation et d'émission.  [...] C'est surtout une question pratique parce que sinon l'expérience est facilement compréhensible et je ne pense pas qu'il faille forcément avoir lu l'article pour me répondre mais je voulais comprendre cette technique donc si quelqu'un peut m'aider.   [...]

Faire produire de la chaleur à des cellules

Sauf à faire remplir la cellule de luciférine à l'aide un entonnoir, je crois malheureusement que la quantité d'énergie libérée sera vraiment infinitésimale. Et je pense que ce sera d'autant plus vrai si tu vas dans la gamme du proche-IR. Les sondes proche-IR (650-900 nm) sont très appréciées en imagerie médicale justement en raison de leur faible atténuation par les tissus bio, qui permet à la lumière proche-IR de voyager loin (une figure bien connue.  [...] http.//www.vision-systems.com/articl...l-imaging.html ). Si tu veux que ton emission soit absorbée par la cellule ou son environnement, il faut au contraire taper à dans les gammes à coté, ou mieux, que la totalité de l'énergie soit libérée par relaxation non-radiative.  [...]

[Divers] Microscopie à fluorescence et confocal

Pour comparer avec l'épifluo, si tu as une cellule (ou disons plutot une racine pour que l'exemple soit parlant) a l'épifluo, du fait de l'épaisseur tu pourras pas focaliser et obtenir juste la fluo qui est à l'interieur, en plein milieu, si tu veut juste voir la zone en plein milieu tu vas devoir passer par une découpe au microtome afin d'avoir une fine tranche, tu peux mettre les sondes fluo (ex anticorps-FITC) sur cette tranche et tu verra cette zone là qui t'intéresse,  [...] Je parle de racine car c'est assez gros et on comprend mieux la notion de plan focal (à l'interieur) quand c'est gros, mais c'est pareil pour une cellule, situ veux voir de manière précise en un plan de la cellule et pas la fluo totale qui se trouve dans la cellule entière, avec un confocal tu peux obtenir la fluo de cette tranche.  [...]

DNAchip

J'avais écris une tartine pour dire en bref que la technique que je décris ci dessus est dans l'objectif de comparer l'expression de deux populations de cellules.  [...] Non dans mon cas aussi c'est pour comparer l'expression dans deux populations cellulaires(l'expression de nombreux genes et non pas d'un seul gène) mais ce que tu appelles sondes dans ton petit 2, moi je l'appelerai plutôt cibles.  [...]

Giardia lamblia

est ce que quelqu'un saurait me dire comment il ferait pour casser les cellules du protozoaire a sec par sondes à ultrason merci beaucoup.  [...] Rajouter une étape de lyse mécanique en rajoutant des billes de verre (Sigma) puis en vortexant a l'aide d un broyrur mecanique et une lyse chimique (proteinase K). Ces etapes permettraient de casser la paroi du parasite qui est tres resistante.   [...]

[Immunologie] Hybridation in situ: sonde ARN

Mais par exemple, je veux regarder les mRNAs de beta-actine dans des cellules humaines. Il existe des dizaines de sondes dont la sequence est donnee dans la litterature. Etant donne que je suis sure que mes cellules expriment l'actine et que sa sequence est tres conservee, il pourrait me suffire de faire synthetiser une de ces sondes.  [...] Enfin, ta sonde ne sera utilisable QUE pour la beta-actine. C'est pour ca que beaucoup preferent faire des clonages et marquer les sondes dans le labo. Le kit de marquage n'est pas tres cher et peut etre reutilise des dizaines de fois.  [...]

Tampon phosphate NaCl?

C'est pour des lavages après hybridation de sondes, sur des lames d'étalements de cellules métaphasiques.  [...] Il existe des tables toutes faites (facilement trouvables sur le web. exemple ici http.//microscopy.berkeley.edu/Resou...n/buffers.html ) qui indiquent quel volume de chaque solution ajouter selon la molarité et le pH final. Selon cette table, pour obtenir un pH de 7,8 il faut 8,5 % de NaH2PO4- et 91,5 % de Na2HPO4(2-).   [...]

PCR en temps réel

il ya l'autre technique de pcr en temps réel qui me pose problème. en sonde d'hybridation, les sondes ne sont pas hydrolysées par la taq alors que c'est le cas en taqman (enfin si j'ai bien compris) et je me demande pourquoi les sondes d'hybridation émettent de la fluorescence quand elles sont cote à cote, c'est bien ça.  [...] par contre je pense que tu fais une confusion (il me semble) il ya 2 techniques bien différentes. le taqman qui utilise un seule sonde qui porte le quencher et le fluorochrome on l'appelle aussi sonde d'hydrolyse car elle et hydrolysée pendant l'élongation par la taq.  [...]