• Forum - Plasmide, Site, Restriction, Enzyme

Carte de restriction

Combien de sites de restriction avez-vous besoin dans le plasmide A pour générer les 2 fragments de 3000 et 500 bp avec une seule et unique enzyme de restriction.  [...] Idem avec le plasmide B pour générer les 3 fragments, en supposant qu'on utilise la même enzyme de restriction pour les 2 plasmides Où se situe le site de restriction surnuméraire et à quoi cela correspond-il concernant la mutation.  [...]

[Biologie Moléculaire] electrophorèse en gel d'agarose

Merci pour votre réponse. (je connais mon cours et ca fait longtemps que je cherchais la réponse à ma question). ce que je ne comprenais pas c'est que dans mon énoncé on me parle d'un plasmide et non d'une cellule. on a digéré le plasmide pBR322 par différentes enzymes de restriction.  [...] mais dans ce cas, si je fais agir une enzyme de restriction qui n'a qu'un site de restriction sur le plasmide il faut que la digestion soit complète pour que je n'obtienne que des fragements de même taille et même volume.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide

Je dispose de deux enzymes de restrictions, une XhoI qui possède deux site de restriction dans la cassette de polyclonage. l'autre enzyme est MluI cependant sur le schema du plasmide je n'ai pas son site de restriction donc je ne sais pas ou elle coupe.  [...] Ensuite nous déposons les digestions réalisées sur un gel d'electrophorese, puis nous preparons un marqueur de taille et egalement un plasmide natif mais non digéré qui contient 2µL du plasmide, 8µL d'eau stérile et 1µL de tampon de depot.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de séquençage

peut etre peut digérer ton plasmide avec une enzyme de restriction en ciblant un site unique a proximité de la région pseudonoeud et effectuer deux séquencage s indépendants.  [...] l'idée n'est pas bete en effet couper dans le pseudonoeud et vérifier en séquencant chaque coté, merci.. Je vais aller voir si par hasard il n'y aurai pas un site de restriction... ca risque d'etre chaud.  [...]

[Biologie Moléculaire] mutagènese, transformation, transfection

Ce que je comprends c'est que vous avez fait une mutagénèse dirigée par PCR à partir d'un plasmide X. Pour éliminer le plasmide matrice X vous avez utilisé la spécificité de l'enzyme de restriction DpnI pour les sites méthylés. Ainsi, l'enzyme a digéré le plasmide matrice, produit en bactérie (donc méthylé) et pas le plasmide produit par PCR, non méthylé.  [...] Pour vérifier une mutagénèse sur un petit insert (d'un ordre de grandeur inférieur au 10Kb) le plus simple est de faire quelques restrictions et un séquençage. Vous n'avez pas fait de séquençage du Bluescript.  [...]

Southern blot et séquençage - Interprétation

Et on remarque que la mutation (transversion) qui a transformé le A en C, a fait apparaitre le site de restriction de l'enzyme (CTCGAG) chez l'individu 2.  [...] J'ai également besoin d'aide sur cet exercice, pourquoi avoir utilisé le brin matrice pour apres repérer le site de coupure de l'enzyme de restriction, n'est il pas possible de le faire avec le brin neosynthétiser.  [...]

[Biologie Moléculaire] comment faire une mutation par PCR?

La mutagenèse permet d'obtenir un court segment de séquence comprenant la région mutée. Il faut ensuite remettre cette séquence dans le plasmide d'origine, à la place du petit segment non-muté. Le meilleur moyen de le faire c'est par simple clonage grâce à des enzymes de restriction.  [...] La mutagenèse permet d'obtenir un court segment de séquence comprenant la région mutée. Il faut ensuite remettre cette séquence dans le plasmide d'origine, à la place du segment non-muté. Le meilleur moyen de le faire c'est par simple clonage grâce à des enzymes de restriction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comprendre les cartes des plasmides

Salut, avec de la chance dans ta séquence tu as des site de restriction ce qui fait que lorsque tu vas couper une enzyme de restriction en dehors de la séquence et une dedans même si c'est bout francs ou pas tu obtiendras donc un fragment d'une masse connu parce que tu as fais la cartographie de ton plasmide avec le sens A et B, puis par électrophorèse tu détermines lequel des plasmides possèdent le fragement en question avec le bon poid moléculaire.  [...] La si tu veux retaper des sites de restriction, c'est trés utile et tu as également la Taq polymerase qui est une adn polymerase qui te sert a effectuer des PCR avec des amorces dans les deux cotés de chaque brin.  [...]

[Génétique] Enzyme de restriction, vecteurs

Le petit chiffre est la position du site de coupure par l'enzyme de restriction. On commence à numéroter les bases arbitraitrement à partir d'une certaine position (ici il semblerait qu'on commence à numéroter à partir du début de la partie codant la résistance à la tétracycline), et on fait le tour du plasmide en numérotant les bases.  [...] Pour compléter on peut dire que les sites présents sur cette carte sont les sites de restriction uniques du plasmide mais il doit en contenir plein d'autre. Tu pourras trouver plus de renseignements sur lifelab plasmid database si tu veux.  [...]

TP biochimie: introduction aux méthodes utilisées en génie génétique

Après je ne sais pas si c'est possible mais tu pourrais peut-être fragmenter ton plasmide, l'injecter dans l'environnement. ensuite tu rend tes bactérie transformante c'est un état où les bactéries sont capable d'incorporer de l'ADN provenant de l'environnement.  [...] ok alors sur tes 3 plasmides tu as un ou plusieurs sites de restriction à EcoRI c'est un site que va reconnaître ton enzyme EcoRI et va donc couper ton ADN plasmidique à cette endroit précisément. Tu connais la taille de tes plasmides en pb et tu sais sur quel pb se situe le site de restriction.  [...]