• Forum - Plasmide, Séquence, Intérêt

Plasmides pour transformation de plantes

Je vais donc faire des doubles transformations. un plasmide contenant mon gène d'intérêt fusionné à la GFP et un plasmide ayant une séquence d'adressage mitochondriale fusionnée à la RFP me servant de marqueur mitochondrial.  [...] Ma question est la suivante. est ce que cela est dérangeant d'utiliser les 2 mêmes plasmides (ou faut-il qu'ils aient des origines de réplication différentes, etc. ).  [...]

[Biochimie] Méthode Cre-Lox : application ?

On insère les sites LoxP de part et d'autre du gène d'intérêt par recombinaison homologue. C'est à dire qu'on prend la séquence des parties flanquants le gène, pour chacune d'elles, on y ajoute le site LoxP. Chaque séquence modifiée (une par partie flanquante) est intégrée dans un vecteur (plasmide ou virus).  [...] Petite parenthèse à ce sujet, dans les séquences flanquantes modifiées qui vont s'intégrer à la région voulue, on ajoute assez loin des régions homologues le gène de la thymidine kinase. Sa présence dans les clones indique une intégration non spécifique.  [...]

[Microbiologie] Un plasmide ouvert peut-il être fonctionnel?

[Microbiologie] Un plasmide ouvert peut-il être fonctionnel.  [...] On a un plasmide circulaire avec x propriétés, on l'ouvre par digestion à un endroit vierge (sans gène d'intérêt) et on l'insère dans une bactérie. Est-ce que ce plasmide (linéarisé) est encore fonctionnel Personnellement j'imagine qu'un plasmide tronqué ça fait un peu désordre puis bon on a quand même séparé une séquence en deux (toute séquence à un intérêt) en petit 2 je pense également que des exonucléases bactériennes pourraient l'éliminer.  [...]

[Biochimie] Travaux pratiques de biochimie des systemes integrés urgents

En général juste pour la fluorescence tu transfecte la cellule avec un plasmide contenant la protéine d'interet suivie de la GFP (ou EGFP pour les eucaryotes je pense) Il s'agit d'une construction à faire à l'aide par exemple d'un plasmide EGFP dans lequel tu insères ta séquence d'interet (mais les manips sont longues, il faut compter un mois au moins).  [...] Le protocole de ceci comprend une première PCR pour produire ton gène d'interet à l'aide de primer possédant des extrémités suplémentaires contenant un site de restriction semblables à ceux présents sur ton plasmide EGFP.  [...]

[Biotechnologie] Plasmide recombinant

2) le plasmide possède systématiquement un gène de sélection (pour vérifier la présence du plasmide) ainsi qu'un gène phénotypique - dit gène raporteur- pour verifier la présence de la séquence d'intérêt dans le vecteur plasmidique.  [...] 7) Lors de l'utilisation d'agrobacterium tuméfaciens, on crée un plasmide contenant un gène de résistance pour E.Coli et pour la plante, une origine de réplication E.Coli, une origine pour Agrobacterium, et puis deux séquence front gauche et front droit dans lequel on retrouve le gène d'intérêt ainsi qu'un gène de sélection pour la plante.  [...]

[Biologie Moléculaire] Librairie de génes !!

Bonjour tout le monde, c'est quoi une librairie de génes elles peut être façonnées par des souches d' E.coli...merci bien.   [...] Pour moi c'est comme une banque de gènes. C'est à dire qu'on a trouvé à quoi le gène correspond et on le conserve dans une banque. Pour cela on introduit la séquence à l'aide d'un plasmide dans une bactérie souvent E.coli (parce qu'on l'aime bien.). Et puis quand on en a besoin, on décongèle et la bactérie se multiplie et amplifie la séquence d'intérêt que l'on récupère et voilà.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage par PCR taille des amorces

Une question simple. j'aimerais cloner un gène dans un vecteur pENTR. J'ai la séquence codante de ce gène dans un autre plasmide, je compte donc l'amplifier par PCR en rajoutant des sites de restrictions en 5' et 3' qui me permettront ensuite de le mettre facilement dans mon pENTR d'intérêt.  [...] En général les oligos font 20-30pb et on essaye d'avoir un ratio équilibré entre les G+C et les A+T (dans ces conditions, une PCR aux température d'hybdridation classiques 51-58°C doit fonctionner). La restriction coupe ton ADN proprement, pas besoin d'ajouter des bases pour protéger ta séquence codante.  [...]

[Biologie Cellulaire] Utilisation de l'ADNc

Du tout en lisant votre reponse une autre m'est venue. pourquoi est ce si avantageur qu'il n'y ait pas de sequence introniques car ds tout les cas lors du processus de transcription les sequences introniques disparaissent.  [...] Moins de problèmes de PCR, moins de problèmes pour les intégrer dans des plasmides, moins de problèmes pour la transfection (plus le plasmide est gros, moins la transfection est efficace), moins de problèmes pour choisir des enzymes de restrictions qui ne coupent pas à l'intérieur de notre séquence d'intérêt, et j'en passe.  [...]

[Biologie Moléculaire] cDNA et TAG quelle relation?

et pour le plasmide pTTQ18 on dit que c'est un plasmide qui ne présente pas de cDNA,et pour ça on peut pas purifié le protéine recombinante qui en résulte par chromatographie d'affinité on utilisons le protéine de fusion issu de la traduction de la sequence TAG. est ce que c'est juste.  [...] - la seconde est une notion de biochimie. Un TAG comme par exemple le TAG histidine est une courte portion d'acides aminés permettant notamment de purifier une protéine produite par génie génétique. Dans ce cas, la séquence en ADN codant pour ce tag est insérée au début du gène d'intérêt dans un plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] pCMX vecteur

Merci, j'avais bien trouvé cette carte mais pas de séquence complète. La référence explique comment le plasmide a été construit à partir de CDN8. A partir de là je peu reconstituer la séquence mais que de temps perdu.  [...] Tu n'as qu'a digérer avec ces enzymes et mettre ton insert à la place en bidouillant un peu. Pourquoi te faut il toute la séquence Le bout de séquence qui pourrait être intéressant, le polylinker, est noté en bas.  [...]