• Forum - Plasmide, Molécules, Bactéries

amplification dans un plasmide

je m'interrsse à la transgenèse et j'ai lu qu'une des étapes pour fabriquer un OGM était l'amplification du plasmide chez l'E.coli.  [...] Lorsqu'on insert une molecule de plasmide chez coli, la bactérie va rpliquer le plasmide jusqu'a avoir 50 à 100 molécules par bactéries.  [...]

[Divers] Plasmide et bactérie

Vous disposerez au depart de 3ml de culture bacterienne ayant poussé toute la nuit, cela represente 3.10^9 bacteries. En admettant qu'apres le TP vous ayez purifié 1microgramme d'un plasmide de 3000 pb, calculez le nombre de molecules de plasmide conte,u dans une bacterie.  [...] Si c'est le point de départ. il faut que tu calcules le nombre total de plasmides. Pour ça, il faut que tu connaisse le nombre total de bases, que tu diviseras par le nombre de bases du plasmide.  [...]

utilisation des résistances aux antibiotiques

Pourquoi n est il pas preferable d'inserer des genes codant pour la synthese de molecules de type fluorescentes ou phosphorescentes pour reperer les bacteries exprimant le plasmide (et donc le gene cible). Ainsi, on eviterai de donner aux bacteries les armes pour contrecarre nos seuls armes.  [...] Le fait est qu'on ne va pas repérer les bactéries qui ont intégré le plasmide, on veut les sélectionner spécifiquement et les isoler.  [...]

[Microbiologie] bacterie resistantes

je dois cultiver des bactéries possédant un plasmide de résistance à un antibiotique. Dans le bouillon, je dois mettre cet antibiotique. Je ne comprends pas pourquoi puisque les bactéries sont résistantes Pouvez m'éclairer.  [...] - Au cours des divisions cellulaires, le plasmide peut ne pas être transmis à certaines bactéries filles, il y aura donc apparition de bactéries non résistantes.  [...]

[Microbiologie] Culture bactérienne troublante

En fait le plasmide ne comprend pas tout le canal chlore, il ne contient que le promoteur de CFTR, associé à une firefly luciferase. Par conséquent les bactéries ne synthétisent rien de mauvais en théorie.  [...] Je viens de relire ton message et comme je ne sais plus qui le mentionnait auparavant, il se peut que la machinerie cellulaire de la bactérie lise le plasmide et synthétise des molécules qui lui serait nocives vu que les constructions sont artificielles en général.  [...]

OGM (l'identification du/des gènes intéressant(s))

je m'interesse aux OGM et j'aimerai savoir comment concretement les scientifiques procèdent pour,une fois qu'ils ont identifié pour une fct° d'un être vivant la ou les protéines qui sont à l'origine de cette fonction (quand je parle de fonction c'est par exemple le fait qu'une bactérie puisse produire une protéine insecticide, ici ce sera sa fonction intéressante), ils retrouvent le gène qui est à l'origine de cette protéine.  [...] Pour le vérifier on l'insère dans un plasmide bactérien et on transforme des bactéries. En cultivant ces bactéries sur un milieu permettant de différencier celles qui produisent notre molécule d'intérêt et celles qui ne la produisent pas, on récupérer les bactéries contenant le gène codant pour la synthèse de cette molécule.  [...]

PCR et vecteur de clonage

Donc il doit etre possible de calculer l'amplification en aprtant du postulat (faux) qu'une seule molecule transforme une bacterie. tu connais le nombre de plasmide par cellule, et le nombre de cellules dans une culture de 5ml alors cela te donne un nombre de molecules.  [...] L'insert, s'il est présent, va être multiplié mais on en a pas l'utilité vu que les bactéries ont déjà du faire ce travail Ne serait-il pas plus simple de digérer le plasmide dans les enzymes de restriction spécifiques de l'insert, et de vérifier si l'insert est présent en faisant une électrophorèse.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gène0 AOX1!!

Un plasmide qui se divise par mitose Certainement pas. la mitose est un processus qui intéressent les cellules, pas leurs sous partie. Pensez donc, c'est comme si vous aviez écrit qu'un chromosome se divise par mitose. ça ne veut strictement rien dire. Un plasmide se réplique et puis voilà. Les bactéries se divisent pas scissiparité.  [...] Pour répondre à Log, en complément à ce qu'a dit piwi, dans une bactérie,on peut trouvé une centaine de plasmides...et ce ne sont pas toutes les bactéries qui vont assimiler le vecteurs, pour les sélectionner,il existe ce qu'on appelle le Criblage...je peux m'étaler si tu veux.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification et purification de plasmide

Pour ce qui est de la GFP je me disais juste que si mes bactéries sont vertes c'est qu'elles ont bien intégré le plasmide mais vu qu'elles poussent en présence d'antibio c'est que c'est bon. Comme elles ne sont pas vertes je pense que c'est juste qu'il n'y a pas de promoteur procaryote pour la GFP dans mon plasmide.  [...] De deux choses l'une. soit ta combinaison plasmide/bactérie donne un faible rendement, soit ta technique de purif ne marche pas. Je te conseille de garder un aliquot (1.5ml) de tes bactéries avant de les lyser pour ta prep sur colonne. Fais une miniprep classique sur cet aliquot (lyse alcaline + isopropanol) et estime ton rendement en plasmide.  [...]

TP biochimie: introduction aux méthodes utilisées en génie génétique

Si tu veux introduire un plasmide en entier ou un voire des gènes dans une bactérie il y aurait la conjugaison où l'on a une bactérie donnatrice qui va donner le plasmide à une bactérie réceptrice par conjugaison. Pour que la donnatrice puisse donner son plasmide il faut que celui-ci possède les gènes tra indispensable pour la conjugaison car ils codent pour la formation des pili permettant le contact entre les 2 bactéries mais aussi le transfert de l'adn de la donnatrice vers la réceptrice.  [...] Après je ne sais pas si c'est possible mais tu pourrais peut-être fragmenter ton plasmide, l'injecter dans l'environnement. ensuite tu rend tes bactérie transformante c'est un état où les bactéries sont capable d'incorporer de l'ADN provenant de l'environnement.  [...]