• Forum - Plasmide, Intérêt, Bactéries

OGM (l'identification du/des gènes intéressant(s))

je m'interesse aux OGM et j'aimerai savoir comment concretement les scientifiques procèdent pour,une fois qu'ils ont identifié pour une fct° d'un être vivant la ou les protéines qui sont à l'origine de cette fonction (quand je parle de fonction c'est par exemple le fait qu'une bactérie puisse produire une protéine insecticide, ici ce sera sa fonction intéressante), ils retrouvent le gène qui est à l'origine de cette protéine.  [...] Pour le vérifier on l'insère dans un plasmide bactérien et on transforme des bactéries. En cultivant ces bactéries sur un milieu permettant de différencier celles qui produisent notre molécule d'intérêt et celles qui ne la produisent pas, on récupérer les bactéries contenant le gène codant pour la synthèse de cette molécule.  [...]

[Microbiologie] Culture bactérienne troublante

Avec le plasmide controle, la culture présentait un aspect habituel avec une solution LB trouble assez homogène. En revanche la culture avec le plasmide d'intérêt présentait de gros agglutinement de bactéries au fond de la bouteille en plus du LB trouble.  [...] En fait le plasmide ne comprend pas tout le canal chlore, il ne contient que le promoteur de CFTR, associé à une firefly luciferase. Par conséquent les bactéries ne synthétisent rien de mauvais en théorie.  [...]

[Biochimie] Problème de transformation

D'où l'intéret de toujours vérifier que les colonies que tu isoles sont résistantes en raison de la présence du plasmide, et non d'une mutation spontanée. Ceci dit, si tes bactéries 'transparentes' ne poussent pas quand tu les repiques, ca veut dire que c'est des faux positifs.  [...] Je ne pense franchement pas que ca ait la moindre influence. le choc thermique est important. si tu diminues la vitesse, tes bactéries n'auront même pas le temps d'être transformées.. et 42°C, pour E. coli, ca n'est pas optimal, mais c'est pas non plus comme si tu les laissais une heure à 60°C, ca ne va certainement pas les tuer.  [...]

[bio mol] pUC et LacZ

Sur le plasmide pUC, on a donc le gène LacZ. Quand on fait le clonage, on va faire en sorte que le gène d'intérêt s'intègre dans le plasmide AU MILIEU du gène LacZ.  [...] En présence de glucose, les bactéries aillant intégrer le plasmide pUC composé du gène LacZ+ du gène d'intérêt ne vont donner aucune coloration, tandis que celle qui ont intégré un plasmide non recombinant (sans le gène d'intérêt, donc avec un gène LacZ non interrompu) vont faire une coloration bleue.  [...]

[Biologie Moléculaire] Le plasmide a t'il l'insert?

Oui, juste compléter. par la néomycine + strepto, tu sélectionneras les bactéries ayant un plasmide recombiné (on nous demande toujours de faire cette vérification pour être sûr que le plasmide porte bien le gène d'intérêt).  [...] Le plasmide de départ est StreptoR et AmpR. Donc, si j'ai des colonies sur LB+strepto+amp, c'est que les bactéries ont intégré le plasmide natif.  [...]

[Biologie Moléculaire] Expression de protéines grâce au pGEX. DH5alpha ou BL21?

J'ai transformé des bactéries DH5alpha avec mon plasmide GST et mon plasmide GST-prot d'intérêt. Pour chaque transformation j'ai effectué un contrôle non induit. J'ai testé deux stragégies d'induction avec 1 mM IPTG. 2h à 37°C ou toute la nuit à 30°C.  [...] Comment prepares tu tes echantillons pour le WB peut etre que ta degradation intervient lors de ta prep. Si c'est juste. resuspension du culot bacterien dans le laemmli puis boil 5' c'est pas terrible pour les proteines. Perso je precipite les proteines au TCA tout en gardant a 0 deg le plus possible.  [...]

Ogm

Les plasmides peuvent se transmettre (mais pas systématiquement non plus, je vais pas détailler ^^) entre des bactéries différentes. On parle de transfert horizontal.  [...] En fait les plasmides existe en plusieurs exemplaires dans la bactérie (selon la taille du plasmide et sont utilité ça peut aller de quelques exemplaires a plusieurs dizaines) mais c est surtout par la multiplication des bactéries que le nombre de plasmides est augmenté ensuite on fait éclater les cultures bactériennes et on récupère les plasmides d intérêt.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gène0 AOX1!!

Un plasmide qui se divise par mitose Certainement pas. la mitose est un processus qui intéressent les cellules, pas leurs sous partie. Pensez donc, c'est comme si vous aviez écrit qu'un chromosome se divise par mitose. ça ne veut strictement rien dire. Un plasmide se réplique et puis voilà. Les bactéries se divisent pas scissiparité.  [...] Le plasmide se trouve dans la bactérie et vit sa vie indépendamment de son hôte. En clair, il se réplique à son rythme. Le nombre de copies présentes dans la bactérie est variable selon les plasmides. Il existe des plasmides qui se répliquent beaucoup (des dizaines de copies par bactéries) et à l'opposé des plasmides qui se répliquent peu (une à quelques unités par bactéries).  [...]

[Microbiologie] bacterie resistantes

- Lorsqu'on insère un plasmide dans des bactéries, certaines bactéries du lot n'insèrent pas le plasmide et restent donc non résistantes.  [...] Cela te permet tout simplement de selectionner tes bactéries ayant bien le plasmide. Seules celles ci pousseront.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage moléculaire

J'aimerai savoir si quelqu'un connaîtrait le protocole pour cloner un gène d'intérêt dans un plasmide bactérien s'il vous plait.  [...]