• Forum - Plasmide, Extraction, ADN

[Génétique] Plasmide

comment purifier le fragment linéaire apres amplification du plasmide pBR 322 dans escherichia coli et extraction de l'adn plasmidique.  [...] Lors de ta PCR t'as surement utilisé des amorces contenant des sites de restriction que tu dois utiliser donc voila tu commence par faire une digestion avec ces enzymes, tu dépose ensuite sur gel pour récuperer ton fragment, et ensuite tu purifie alors il existe plusieurs techniques de purfi pour des produits PCR recuperes à partir de gel.   [...]

[Biologie Cellulaire] Problème quantité d'adn plasmidique après extraction

Je viens vous trouver car j'ai un petit doute quand à une extraction d'adn plasmidique. Habituellement j'utilise des kit qiagen (miniprep) et j'obtiens environ 100ng/µl de plasmide.  [...] Sinon nous en routine on fait des exctractions phenol/chlo pour des minipreps (4ml de culture) puis sequencage. Si c'est bon on sequence le plasmide obtenu.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteur de clonage et autre sur le web

Alors pour satisfaire ta demande je recherche effectivement des bactéries ou des vecteurs servant a l'extraction de plasmide et la technologie d'ADN recombinant en introduisant un gène étranger a la bactérie dans son génome plasmidique.  [...] Classiquement pour ce genre d'expérience, on utilise les souches E. coli DH5 alpha pour l'amplification d'un plasmide d'intérêt (elles sont faciles à transformer), et pour l'expression de protéines recombinantes, ce sont plutôt les E. coli BL21. Il existe des variantes bien sûr mais ce que je veux dire c'est que suivant l'utilisation que tu compte faire, les outils à choisir seront différents.  [...]

Precipitation adn plasmidique

Bonjour, après une extraction d'adn plasmidique avec un kit qiagen, je me retrouve avec de faibles concentrations de plasmide. Je souhaterais donc le concentrer un peu afin de pouvoir par la suite le sequencer.  [...] Pour concentrer ton ADN, tu peux éventuellement utiliser un désicateur pour évaporer un peu d'eau de ton produit de purification d'ADN plasmidique.  [...]

[Biochimie] Resistance à la zeocine pourquoi ?

En procédant à l'extraction de l'ADN plasmidique pour controler la presence du plamside recombinant, je n'ai trouvé aucun plasmide et ça m'a intrigué comment est ce possible d'ou est ce qu'elles tiennent cette resistance ce sont pas des bactérie satellite a mon avis selon leur taille.  [...] Ce que je veux dire c'est que dans ton échantillon test, tu as des solutions que tu ne contrôles pas. le tampon dans lequel est ton plasmide, le tampon dans lequel tu le dilue, et d'autres comme les tampons pour ligation... en fonction de ton clonage. Ce n'est évidemment qu'une supposition.  [...]

[Biologie Moléculaire] Quantité totale de plasmide

Dans un premier temps, vous devez réaliser l'extraction des plasmides à partir de culture de bactéries. Pour chaque culture (A ou Amut), vous disposez de 12 ml contenant 3 × 10 puissance neuf bactéries par ml.  [...] Chaque bactérie contient 50 copies d'ADN de plasmide d'une taille De 3500 paires de bases ( même taille pour A et Amut). Le rendement de l'extraction est de 75 %.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ADN

Si c'est une extraction d'ADN plasmidique, la présence d'une pelote ou de longs filaments témoignent d'une contamination des plasmides par de l'ADN génomique bactérien. Quel est ton type d'extraction d'ADN. ADN total ou ADN plasmidique.  [...] Personnellement j'ai extrait de l'ADN génomique du soja par les méthodes classiques basées sur l'utilisation de détergent (CTAB et SDS ) par deux protocoles différents et dans les deux cas j'ai obtenu un précipité sous forme d'écaille. je n'ai pas compris qu'on est-ce que on obtient une pelote d'ADN et quelle est la relation entre la forme et le degré de contamination de l'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Petites questions autour de l'extraction d'ADN plasmidique !

en tp nous avons extrait l'adn plasmidique de deux cultures bactériennes par la technique de lyse alcaline. Puis nous avons mesuré la DO à 260 230 et 280nm.  [...] Petite correction... Pour faire une bonne extraction de g è nes plasmidiques, il vaut mieux éviter que le solvant g ê ne la lecture.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ADN Plasmodium

Je suis doctorant en parasitologie, une partie de mon travail repose sur la PCR de plasmodium. Le problème c'est que j'ai pas trouvé dans la bibliographie un protocole d'extraction d'ADN parasitaire depuis le sang total, j'ai trouvé seulement des méthodes utilisant des kit d'extraction tel que QUIgen.  [...] extraction de l'ADN totatal par l'un de ces deux protocole puis ensuite PCR avec des amorces spécifiques de Plasmodium, ca devrait faire l'affaire.  [...]

[Génétique] Extraction d'ADN plasmidique de bactéries

Bonjour, alors voila j'ai fait un TP sur l'extraction d'ADN et pour faire mon compte rendu j'ai un petit soucis, le spectrophotomètre indique que ma solution a.  [...] J'ai la présence de composés aromatiques et de très peu d'éthanol dans ma solution, mais je me demande comment j'ai pu contaminer ma solution, est ce du au tampon que j'ai utilisé pour solubiliser et dénaturer les protéines.   [...]