• Forum - Plasmide, Expression, Promoteur

[Biochimie] Plasmide de clonage et d'expression

je suis à la recherche d'un professeur de biochimie ou une personne pouvant me dire concrètement comment distinguer par l'intermédiaire d'une carte de restriction si [un plasmide est dit de clonage ou d'expression.  [...] POur ta question sur les plasmides, la seule difference entre un plasmide de clonage et un plasmide d'expression, est que le second possede un promoteur permettant l'expression du gene.  [...]

[Biologie Cellulaire] gal4

Vous avez des systèmes double hybride avec une complémentation gal4-VP16 pour trouver des protéines interagissantes entre elles. Vous avez aussi des tests en culture cellulaire avec des fusions Gal4-protX sur constructions 17m-rapporteur. Elles permettent de tester l'activité activatrice ou répressive sur la transcription.   [...] il y a aussi tout simplement toute une série de plasmide d'expression posssedant le promoteur GAL4, qui permet d'induire l'expression du gene cloné qu'en absence de glucose (en presence de galactose par expl).  [...]

[Biologie Cellulaire] probleme de transfection

Normalement je devais cotransfecter dans une lignée cellulaire un plasmide avec le promoteur qu'on étudie et qui contrôle l'Expression de la luciferase, et le plasmide controle codant pour la beta-Gal.  [...] Tu vas probablement avoir une haute mortalité cellulaire (plus que d'habitude en tout cas), donc un max de déchets cellulaire dans le milieu. Mais les survivantes devront être normal (ou stressé à la limite, ce qui est jamais bon dans des expériences d'expression de gène).  [...]

PCR, template et riz anti-alzheimer

Transgenic Rice expressing Amiloid beta-peptide for Oral Immunization, T.Yoshida, E.Kimura, S.Koike, International Journal of Biological Sciences, 7(3).301-307, 2011.  [...] 4) Je n'ai pas le temps de lire le papier, mais en général le plasmide contient un promoteur qui permet une expression plus ou moins forte de ce qui se trouve derrière. Ca dépend du tissu cible, de si on veut une expression constitutive ou inductible, etc.  [...]

[Biologie Moléculaire] Expression d'un gène d'enzyme !

un viel homme a isolé une petite quantité d'attractase,une enzyme produisant une phéromone humaine puissante,à partir d'echantillon de cheveux de célébrités hollywoodiennes.Pour produire de l'attractase à son usage personnel,il a obtenu un clone génomique complet du gène de l'attractase,l'a connecté à un promoteur bactérien puissant dans un plasmide d'expression et a introduit le plasmide dans des cellules d'E coli.  [...] il a été anéanti de découvrir qu'aucune attractase n'etait produite par les cellules.Quelle est 'explication de son echec.   [...]

Problème de rendement kit Maxiprep

J'étais justement en train de faire des recherches sur l'ajout de chloramphenicol mais c'est recommandé pour les plasmides ayant une origine de réplication pMB1 ou ColE1. D'après la carte de mon plasmide, ce n'est pas le cas (quoique je m'interroge quand même car il a une pUC ori donc s'agit-il d'une origine pMB1 J'ai l'impression que j'ai trop de lacunes dans mes connaissances.  [...] Tu as dit que tu utilisais une souche d'expression, pour peu que ton gène possède tout son CDS et qu'il y a un promoteur dans le plasmide, si la bactérie l'exprime correctement il se peut que cette protéine ait un effet,  [...]

[Biologie Moléculaire] Fournisseur plasmide d'expression (avec ORF spécifique)

Je recherche une boite qui pourrait me fournir (rapidement) un plasmide d'expression avec l'ORF de mon choix (de la même manière que l'on choisi des siRNA dans une banque).  [...] La question que l'on pose à l'aide de ce plasmide est urgente donc j'aimerai trouver le plus vite possible un plasmide d'expression AVEC PROMOTEUR et l'ORF d'intérêt. J'ai regardé chez Dharmacon, Invitrogen, Qiagen, Eurogentec et je n'ai rien trouvé.  [...]

[biologie moléculaire] opéron lactose

bonjour,comment il ya une faible expression du gene si le promoteure ou se fait l'initiation de la transcription est bloqué par l'operateure qui contient le represseure SVP d'ecrivez moi le mecanisme exacte,avec les utils qui vont intervenir et mercie.  [...] transformation de bactéries lac- avec un plasmide codant pour le promoteur de l'operon lactose couplé au gène lacz ou CAT et vous regardez le niveau d'expression basal du gène par spéctrométrie après révélation de la présence de l'enzyme que vous aurez choisi (pour le lacz j'utilise le x-gal, pour CAT j'utilise plutôt un test elisa).  [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteurs, gènes et plasmides

il faut surtout faire attention qu'il soit spécifique de là ou tu vas faire exprimé ton plasmide, car un promoteur bactérien est différents d'un promoteur eucaryote ou viral.  [...] par exemple si tu veux mettre un gène humain dans un plasmide et faire exprimer ce plasmide dans une bactérie tu dois avoir un promoteur bactérien, sinon la machinerie cellulaire ne le reconnaitra pas.  [...]

Faire suivre une promoteur eucaryote et procaryote

Dans la construction du plasmide il est précédé du promoteur du CaMV 35S. Cependant pour réaliser la selection des bactéries transformé puis des cellules végétales transformé, on a besoin de l'expression de NPTII à la fois dans les bactéries et les cellules eucaryotes.  [...] Ma question est donc a-t'on pu laisser le promoteur procaryote initiale de NPTII, précédé du promoteur eucaryote 35S pour avoir une expression dans les deux situation, cela fonctionnerai t'il d'avoir deux promoteur qui se suivent Où a t'on simplement fait deux copies du gène NPTII, un avec son promoteur initiale l'autre avec le 35S.  [...]