• Forum - Plasmide, Culture, Bactéries

[Biochimie] Nickel et congélation ...

Ce peptide forme des corps d'inclusion justement d'où l'utilisation d'urée aussi pour les récupérer. En fait j'ai testé plusieurs choses et il faut que je recoupe tout ça. J'avais testé avec de la guanidine aussi mais là je retrouve mon peptide dans le culot après la lyse des bactéries.  [...] culture des bactéries (transformées avec le plasmide codant pour ta protéine) à 37°C jusqu'à A 600 = 0,8.  [...]

[Microbiologie] Culture bactérienne troublante

Les deux ont intégré le plasmide correctement. Une transfection avec un plasmide controle a été réalisé. La culture bactérienne (LB+Amp) s'est faite a 37°C sur plateau shaker.  [...] Avec le plasmide controle, la culture présentait un aspect habituel avec une solution LB trouble assez homogène. En revanche la culture avec le plasmide d'intérêt présentait de gros agglutinement de bactéries au fond de la bouteille en plus du LB trouble.  [...]

[Divers] Plasmide et bactérie

Vous disposerez au depart de 3ml de culture bacterienne ayant poussé toute la nuit, cela represente 3.10^9 bacteries. En admettant qu'apres le TP vous ayez purifié 1microgramme d'un plasmide de 3000 pb, calculez le nombre de molecules de plasmide conte,u dans une bacterie.  [...] Si c'est le point de départ. il faut que tu calcules le nombre total de plasmides. Pour ça, il faut que tu connaisse le nombre total de bases, que tu diviseras par le nombre de bases du plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] urgent besoin d'aide!!!

Vous disposerez au départ de 3 mL de culture bactérienne ayant poussé toute la nuit, cela représente 3x10^9 bactéries. En admettant qu'après le TP, vous ayez purifié 1 microgramme d'un plasmide de 3000 paires de bases. Calculez le nombre de copies de plasmide contenu dans une bactérie.  [...] c'est une question issue d'un tp auquel nous n'avons aucune bases de cours pour s'y référer, et j'ai cherché pendant des heures durant mais en vain, auriez-vous la gentillesse de m'aider. merci beaucoup d'avance.   [...]

Problème de rendement kit Maxiprep

Mais commence déjà par essayer de laisser tes bactéries se développer plus longtemps, plus de bactéries = plus de plasmide (pas trop longtemps non plus car si tu sature tu auras des problème de rendement aussi, mais attend que ta culture liquide soit quand même bien trouble et nuageuse).  [...] Le fait est que si c'est un plasmide multi copy, tu ne devrais pas avoir de problème de rendement avec un kit, c'st pour ca qu'on mentionne ta culture bacterienne (laisser plus longtemps ou vérifier la DO pour voir si ta densité est assez élevé). Overnight est censé être suffisant mais mettre en culture vers 16-17h et récupérer le lendemain vers 10h, c'est un peu plus que overnight et ca marchait très bien pour moi, mais si c'est bien trouble ca devrait etre bon normalement (et oui prend ta DO mesure un zéro et celui avec les bacteries avant incubation, puis remesure les deux après incubation).  [...]

Precipitation adn plasmidique

Si tu n'obtient pas assez d'ADN, repars avec une culture plus importante, ou essaie de ne pas dépasser la phase de plateau lors de la pousse de tes micro-organismes.  [...] Autre solution tu rajoute a ta culture sur la nuit un peu de chloramphenicol pendant quelques heures. Ca bloque la multiplication des bacteries mais n'affecte pas pas la replication de l'ADN. donc tu augmente la quantité de plasmide dans tes bacteries.  [...]

[Génétique] Gène inconnu

En oubliant la thermostabilité, ne serait il pas plus simple de prendre une lignée de bactérie possédant un plasmide codant pour un quelconque rapporteur (résistance à un antibio, Lacz, Luc, etc...). C'est exactement le même projet, sauf que cette fois ci, il est réalisable.  [...] culture de la ligné 1 (portant le plasmide) et de la lignée 2 (pas de plasmide) sur milieu sélectif. Les bactéries 1 répondent à la sélection, pas les bactéries 2.  [...]

[Biologie Moléculaire] Nombre de copie de plasmide

Vous disposerez au départ de 3 ml de culture bactérienne ayant poussé toute la nuit, cela représente 3.10^9 bactéries. En admettant que vous avez purifié 1µg d'un plasmide de 3000 Bp. Calculer le nombre de copie contenu dans une bactérie.  [...] J'avais pensé à faire le poids total des bactéries en Bp mais après j'ignore comment mettre en relation le 1µg et les 3000 Bp du plasmide =S.  [...]

[Biologie Moléculaire] amplification: PCR vs plasmides

Quels sont les différents avantages/inconvénients de la PCR et de l'amplification par culture d'E.Coli contenant un plasmide de notre fragment.  [...] Comme l'a précisé Piwi, une amplification par PCR est moins fidèle qu'une amplification par culture bactérienne, à moins d'utiliser des enzymes High Fidelity (Pfu, KOD, Herculase...) qui généralement coûtent au final plus cher en amplification et séquençages que le matériel et le temps nécessaires pour faire une culture de bactéries et une prep de plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] bacterie/plasmide

Alors on dispose de 3ml de culture bacterienne qui represente 3.10^9 bacteries.En admettant qu'on purifie 1 µg d'un plasmide de 3000 paires de bases.on nous donne qu'1 base=310 daltons.il faut calculer le nombre de copies de plasmide contenue dans une bacterie.  [...] Tu sais que tu as 3.10 9 bactéries qui contiennent 1 µg de plasmide. Du coup tu peux directement calculer la masse de plasmides par bactérie.  [...]