• Forum - Plasmide, Clonage, Expression

[Biochimie] Plasmide de clonage et d'expression

je suis à la recherche d'un professeur de biochimie ou une personne pouvant me dire concrètement comment distinguer par l'intermédiaire d'une carte de restriction si [un plasmide est dit de clonage ou d'expression.  [...] POur ta question sur les plasmides, la seule difference entre un plasmide de clonage et un plasmide d'expression, est que le second possede un promoteur permettant l'expression du gene.  [...]

Clonnage du gene de la transfferine

pour construire une banque pour un gène d'intérêt tel que le gène de la transferrine.   [...] quel type de plasmide faut il utiliser (plasmide d'expression ou de clonage).  [...]

[Biologie Moléculaire] pCMX vecteur

Je viens de recevoir le vecteur d'expression pCMX mais l'expéditeur ne possédait pas la séquence ainsi que la carte. J'ai regardé sur le net mais impossible de trouver les caractéristiques de ce plasmide. J'aimerai savoir si quelqu'un possède ces informations ou sait où je peux les trouver.  [...] C'est le problème de la sous-traitance. Certains sous-traite leur travail (le clonage en particulier) et ne demandent pas les caractéristiques du plasmide du moment ou ils possèdent leur gène d'intéret dans un vecteur d'expression.  [...]

[Biologie Moléculaire] D'une protéine à un gène à une protéine

Ensuite, si tu as besoin de modifications post-traductionnelles (glycosylation, formation de ponts disulfure) tu peux mettre ce gène dans un plasmide d'expression eucaryotique, et faire de l'expression dans des cellules CHO, par exemple.  [...] Et ils optimisent les codons pour l'expression dans l'hôte choisi, ils optimisent les séquences pour la stabilité des mRNA, et on peut leur imposer des sites de restrictions dans le gène (pratique pour faire des cassettes)... Si on leur donne le plasmide d'expression, ils font même le clonage (mais il y a un surcoût de quelques centaines d'euros).  [...]

[Biologie Cellulaire] Plasmide eucaryote/bactérien dans une lignée cellulaire

Tous les promoteurs eucaryotes ne sont pas identiques certains fonctionne chez d'autres espèces (en général ce sont des gènes issus d'organismes pathogènes) mais selon mon expérience la plupart du temps ça ne marche pas. C'est pourquoi on utilise des plasmide dit d'expression qui ont un promoteur et un terminateur plus ou moins fort en fonction de ce que tu veux faire voir même inductible, provenant en général de l'organisme hôte.  [...] Sinon c'est un gène humain, je sais que le promoteur naturel est assez fort mais quand je transforme une lignée cellulaire avec un plasmide bactérien (donc sans origine de réplication eucaryote) contenant ce gène je n'observe aucune expression. Je cherche donc a savoir si le problème vient du vecteur bactérien ou non avant de me lancer dans le clonage du gène dans un vecteur eucaryote.  [...]

[Biochimie] nucléase

Le moyen couramment utilisé en labo est de virer le groupement phosphate des extrémités 5' générées après coupure. Pourquoi ne voudrais-tu pas que ça se réassocie. exemple, tu veux exprimer une protéine dans une bactérie pour l'étudier. tu insères le gène codant pour ta protéine dans un plasmide d'expression bactérien qui contient donc une cassette de clonage.  [...] Est-ce que ta question concerne un contexte de clonage Je veux dire par là, ouvrir un plasmide, liguer un insert, le faire exprimer par une bactérie.  [...]

[Génétique] clonage orienté ou non

On peut être amener à effectuer ce genre de clonage lorsque l'on réalise des banques oû l'on désire seulement isoler chaque gène composant un génome dans un plasmide.  [...] Par contre, si on réalise un clonage ayant pour but d'exprimer une protéine, l'orientation de notre insert dans le plasmide d'expression sera primordial pour que le couplage transcription/traduction se réalise.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR avec augmentation de la T°C d'hybridation?

Pet15 est un plasmide d'expression qui possède un HisTag. Tu n'as plus qu'a cloner ton insert en phase dedans et le tour est joué. Ca évite d'avoir à réinventer la roue à chaque clonage.  [...] Séquencage obligatoire si tu as des zones à forts %CG. Les TAQ y perdent parfois peur petits et tu te retrouves avec une base en plus ou en moins. C'est pas trop grave pour un clonage pour faire une sonde. Mais pour l'expression de protéine c'est dramatique, tu peux te prendre un décalage de phase qui te pourri ton truc.  [...]

[Biochimie] clonage et expression de gènes chez la levure

voila comme je ne suis pas très fort en biologie moléculaire, je me demande pourquoi effectue-t-on le clonage et l'expression des gènes plutot chez la levure que la bactéire.  [...] Il semble de plus que les bactéries utilisent des acides aminés qui n'existent pas chez les eucaryotes (synthèse à partir d'un acide aminé lié à son ARNt), ce qui perturberait l'expression protéique d'un gène d'eucaryote.  [...]

[Biologie Moléculaire] comment faire une mutation par PCR?

La mutagenèse permet d'obtenir un court segment de séquence comprenant la région mutée. Il faut ensuite remettre cette séquence dans le plasmide d'origine, à la place du petit segment non-muté. Le meilleur moyen de le faire c'est par simple clonage grâce à des enzymes de restriction.  [...] La mutagenèse permet d'obtenir un court segment de séquence comprenant la région mutée. Il faut ensuite remettre cette séquence dans le plasmide d'origine, à la place du segment non-muté. Le meilleur moyen de le faire c'est par simple clonage grâce à des enzymes de restriction.  [...]