• Forum - Plasmide, Cible, ADN

[Biologie Moléculaire] Preparation d'une gamme étalon ou standard pour PCRq

Pour économiser du temps et de l'argent, je pense pas faire les étapes que vs avez cité (en plus le plasmide il faut commander car non dispo chez moi).  [...] J'ai simplement le nom de la souche, comment je peux commander le plasmide linéarise contenant la séquence cible avec une concentration connue.  [...]

Normalisation RT-PCR quantitative

Souvent, les gammes sont faites avec des plasmides portant la cible. Comme tu connais exactement la séquence de ton plasmide, ou au moins son nombre de bases, tu peux calculer sa masse moléculaire, et de là, en déduire le nombre de copies de plasmide par mg d'ADN.  [...] Si c'est bien ça, tu n'as, en effet, pas besoin de faire de gamme d'ADN génomique ou de produit PCR ou de plasmide. C'est un peu comme en Northern quand tu exposes plus ou moins longtemps le film sensible.  [...]

Intégration de VIH-1 dans la chromatine: la chute d'un dogme.

Ce système fait intervenir un plasmide dans lequel on a cloné une séquence positionnant les nucléosomes afin de reproduire un polynucléosome après assemblage d'histones. Ce plasmide mime l'ADN cible cellulaire.  [...] Une fois le système opérationnel, on a réalisé de l'intégration in vitro sur ce plasmide chromatinisé en présence d'intégrase pure recombinante et d'un pseudo ADN viral.  [...]

[Biologie Moléculaire] Hybridation d'une sonde nucléique plasmidique

Voila j'ai un petit probleme lors d'un TP sur l'hybridation d'une sonde nucléique plasmidique non radioactive sur colonies bactériennes on me demande la nature et le role des dépôts d'ADN génomique et ADN plasmidique.  [...] J'ai répondu que l'ADN plasmidique est le témoin négatif et l'ADN génomique le témoin positif car il contient la séquence cible mais je ne sais pas comment l'expliquer ni comment expliquer leur nature.  [...]

transgenese

C'est un virus dont le matériel génétique est de l'ADN double brin de 36 kb. L'adénovirus amène le gène thérapeutique dans le noyau de la cellule cible, qu'elle soit en mitose ou nom Par contre le gène ne s'intègre pas au chromosome mais reste en position épisomale.  [...] De l'ADN plasmidique est injecté dans le tissus cible (par exemple le muscle de la patte d'une souris) puis on applique deux plaques d'acier contre la patte qui servent ainsi d'électrode, on envoie ensuite des impulsions électriques répétées, en essayant de trouver les fréquences et intensité correspondant au meilleur transfert.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment analyser les résultats de PCR quantitative???

La PCR quantitative se base sur le fait qu'à chaque cycle on double la quantité de la séquence cible. Et que pendant la phase exponentielle (quand aucun élément de la PCR n'est limitant) la quantité d'ADN cible à un cycle donnée est proportionnel à la quantité initiale de la cible.  [...] Est ce que cela veut dire que mon gène de cible est exprimé 2 fois moins dans cette condition que dans la condition standart Pourtant la valeur de DCt diminue. le Ct moyen de mon gene de ref reste aux alentours de 28, mais la valeur de Ct moyen de mon gene cible passe de 16 à 18,5.  [...]

[Biologie Moléculaire] des bactéries... virales?? suis perdu...

Il faut savoir que les virus ne choissisent pas leurs cible selon l'ADN de la cible. Les virus se fixe sur des récepteurs, en général, extracellulaire. Ces récepteurs sont spécifique de la cible ou la classe d'organisme que le virus infecte.  [...] Suite à cette reconnaissance, le virus est endocyté, fusionne ou injecte sont ADN selon les cas. L'injection de l'ADN est le mode de pénétration le plus fréquent (ou du moins le plus étudié) chez les bactériophage. Le virus injecte sont génome après avoir ouvert un pore dans la paroi et laisse sa capside hors de la cellule infecté.  [...]

[Génétique] Construire un vecteur de transgenèse dérivé des transposons

Par contre es tu sûr que T a été rajouté J'avais cru comprendre qu'il existait déjà dans le plasmide, mais ce que je ne comprenait pas c'est comment ce T plus qu'un autre était reconnu par le A (parce qu'apparement l'amplicon se fixe à un endroit précis sur pGEMT).  [...] Tu es sûr de ton coup là Ca me laisse perplexe. je sais que la Taq a un taux d'erreur assez important (par rapport à Pfu, par exemple ), mais de là à dire que la Taq rajoute toute seule un nucléotide précis à l'extrémité d'un oligo pour que ce nucléotide assure le bout cohésif qu'il faut pour le plasmide... je t'avoue ne pas être sûre de ce truc.  [...]

Virus Hiv -Sida

pour la question 3, le virus HIV injecte son matériel génétique (l'ADN ms là c de l'ADN viral) ds la cellule cible (LT4 sont ces préférés ms d'autres st egalement infectées) et cette cellule integre ce bout d'ADN ds le sien.  [...] Enfin on retrouve une intégrase dans la capside permettant au génome viral de s'intégrer au génome hôte. En résumé, la capside d'un rétrovirus contient 2 enzymes qu'on ne retrouve pas chez un virus à ADN ou à ARN monocat ou bitcat. la transcriptase inverse et l'intégrase.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage

Il est possible d'obtenir de grande quantité de protéine en le faisait produire par des bactéries ayant reçu le plasmide recombinant contenant le gène cible.  [...] En général on préfèrera utiliser un gène sythétique (à condition de connaître la séquence, bien évidement) dans lequel on aura mis les exons qui nous interesses (On envoi la sequence à une boîte de biotech qui nous renvoi un plasmide contenant cette sequence), en plus, de cette manière on peut accommoder les codons qui vont bien avec la souche.  [...]