• Forum - Plasmide, Bactéries, ADN

[Biologie Moléculaire] Contrôle négatif clonage

je n'ai pas dit ça. ce que je dis c'est que dans un contrôle négatif, on transforme les bactéries avec de l'eau (en fait, on ne les transforme pas), alors que dans un contrôle positif, on les transforme avec le vecteur seul.  [...] Si il s'agit d'un vecteur non ligé il ne sera pas refermé sur lui même et ne pourra donc pas rentrer dans les bactéries... = pas de colonies.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transformation chez la bactérie ?

Si ton ADN est un plasmide, et alors il peut rester (et être répliqué) sans s'intégrer au gnome de la bactérie.  [...] oui c'est à peu près ca. ca va rajouter la séquence en plus. des fois, ca grignote des morceaux en plus, c'est pas un truc bien propre, non plus.   [...]

[Biologie Moléculaire] Contamination transformation

- Lorsque je centrifuge les bactéries, le culot n'a pas un aspect normal et blanc comme il doit l'être habituellement avec des E.Coli.  [...] Euh... Ce que je ne comprends pas c'est comment c'est possible qu'après une prep tu ne récupères aucun ADN... S'il y avait un contaminant, tu aurais récupéré son ADN plasmidique.  [...]

[Génétique] les différentes étapes pour une PCR

C'est pour activer la polymérase. Afin d'éviter l'amplification de produits aspécifiques pendant la préparation de la PCR, les dernières générations de Taq doivent être activée à la chaleur (Hot Start en anglais). Il se peut aussi que ta Taq ait été incubée avec des anticorps bloquant son activité.   [...] Ceci est valable pour l'ADN génomique. Pour un plasmide, 2 min suffisent largement. Pour l'ADN génomique, je préfère chauffer une fois pour toute à 95° pendant 10min, puis mettre sur glace (important pour que les 2 brins ne se ré apparient pas totalement).  [...]

ADN ARNm

Pour les eucaryotes par contre c'est différent. Le code pour le matériel génétique du noyau est toujours le même, mais le génome plasmidique (mitochondrie, chloroplastes) est géré par un code différent.  [...] Pas très claire cette réponse. As tu compris ce qu'était le code génétique Comment un plasmide peut il avoir un code génétique C'est un bout d'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Créer un plasmide...?

Quand a creer un nouveau plasmide a partir de choses deja existantes, ben c'est encore plus facile, on fait ca tout le temps. Il suffit d'amplifier ton gene/sequence d'interet, de le cloner dans un plasmide la ou tu veux, et le tour est joue (dans ce cas la tu gardes le squelette plasmidique de depart).  [...] Tu veux reellement creer un plasmide c'est a dire sans utiliser d'ADN deja existant A mon avis le plus simple est de faire synthetiser des oligos d'une centaines de pb, de les cloner bout a bout dans un plasmide connu, puis de virer la partie connue et de re-liguer ton super plasmide tout nouveau sur lui meme.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide

Bonjour, je voudrait savoir s'il était possible d'intégrer un plasmide à une cellule eucaryote D'après ce que j'ai trouvé sur le net, les seuls eucaryotes à posseder un plasmide sont les levures saccharomices cervisiae. Est-ce que ce sont vraiment les seules eucaryotes à avoir un plasmide Et est-ce qu'un eucaryote qui n'a habituellement pas de plasmide pourrait en incorporer un et le rendre fonctionnel.  [...] Dans la même idée, j'aimerais savoir si lors de vectorisation chimique ( DEAE dextran, phosphatede calcium ou liposomes) ou physique ( bioloistique, electroporation) l'ADN inséré devait être un plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Préparation de plasmide, chloramphenicol

Le kit utilise pour la maxiprep est utilise en routine au laboratoire, on le connait donc plutot bien, les bacteries aussi. on a essaye avec plusieurs souches et les rendements sont toujours aussi mauvais. Du coup, pour ameliorer un peu tout ca, on a ajoute du chloramphenicol dans le milieu, en suivant le protocol du Maniatis.  [...] J'ai deja travaille avec les versions anterieures de ce meme plasmide (que je mute par ci par la), mais dans d'autres souches de bacteries. Elles etaient deja plus ou moins recalcitrantes (notamment du fait de la taille, je pense, environ 12kb), mais c'etait gerable.  [...]

[Biologie Moléculaire] Colonies de bactéries

Cela me donne l'impression que mes colonies sont hétérogènes et contiennent différentes populations de bactéries. Est ce donc possible qu'une colonie récupérée sur un milieu LB Agar ne soit pas pure.  [...] La strategie est generalement de transformer en meme temps le plasmide a modifier et l'insert, et dans des proportions ou une bacterie sera transformee par un seul plasmide a la fois. Pas mal de mise au point en perspective.  [...]

Intégration dans un plasmide

Savez vous comment s'effectue l'intégration d'un gène dans un plasmide bactérien (Le gène a déjà réussi a pénétré dans la bactérie grâce à la transformation).  [...] Et uniquement in vitro L'intégration d'un gène (dans un plasmide) qui a réussi a pénétré dans une bactérie ne peut se faire qu'in vitro.  [...]