• Forum - Plasmide, Bactérie, Promoteur

[Biologie Moléculaire] Clonage

Il est possible d'obtenir de grande quantité de protéine en le faisait produire par des bactéries ayant reçu le plasmide recombinant contenant le gène cible.  [...] 2. le plasmide n'est pas introduit dans le génome de la bactérie. Il est inséré dans la bactérie, mais se réplique de manière autonome. Il est d'ailleurs transcrit sous le contrôle de son propre promoteur.  [...]

Problème de rendement kit Maxiprep

Mais commence déjà par essayer de laisser tes bactéries se développer plus longtemps, plus de bactéries = plus de plasmide (pas trop longtemps non plus car si tu sature tu auras des problème de rendement aussi, mais attend que ta culture liquide soit quand même bien trouble et nuageuse).  [...] Tu as dit que tu utilisais une souche d'expression, pour peu que ton gène possède tout son CDS et qu'il y a un promoteur dans le plasmide, si la bactérie l'exprime correctement il se peut que cette protéine ait un effet,  [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteurs, gènes et plasmides

il faut surtout faire attention qu'il soit spécifique de là ou tu vas faire exprimé ton plasmide, car un promoteur bactérien est différents d'un promoteur eucaryote ou viral.  [...] par exemple si tu veux mettre un gène humain dans un plasmide et faire exprimer ce plasmide dans une bactérie tu dois avoir un promoteur bactérien, sinon la machinerie cellulaire ne le reconnaitra pas.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage dans plasmide

Il n'est pas nécessaire d'introduire dans le plasmide les sites de régulations spécifiques au gêne, car le plasmide (sans le gêne d'intérêt)peut déjà contenir divers éléments dont un promoteur et parfois d'autres éléments régulateurs, cela dépend de l'utilité que tu en as.  [...] On me dit qu'un chercheur a isolé une petite quantité d'une certaine enzyme. Il a ensuite obtenu un clone génomique complet du géne codant l'enzyme, puis il le lia à un promoteur bactérien fort sur un plasmide. Une fois le plasmide introduit dans E.coli, il constata qu'aucune enzyme n'était produite.  [...]

[Biotechnologie] le système pET - surexpression de protéines

le système pET est un plasmide qui se trouve dans une bactérie lysogène qui a alors un gène codant pour la T7 RNA polymérase et son promoteur incorporé à son génome.  [...] 3)le promoteur lacUV5 est le promoteur de n'importe quelle T7 RNA polymérase ou juste celle provenant du bactériophage DE3.  [...]

[Biologie Moléculaire] Exprimer une protéine fonctionnelle en plasmide

Mais en fait il provient d'où ton ADN, parce que est ce qu'un ADN humain par exemple pourra bien s'exprimer dans une bactérie Autrement dit, est ce que la bactérie possède les éléments necessaires pour épisser un gène d'origine différente que le génome bactérien.  [...] Il ne veut pas l'exprimer dans une bactérie puisqu'il précise qu'il clone son gene sous control du promoteur CMV qui est un promoteur viral eucaryote.  [...]

[Microbiologie] Culture bactérienne troublante

Est-ce qu'il serait possible que ton plasmide possède un promoteur qui modifie la stochiométrie de certains facteurs de transcription connus pour être impliqués dans l'auto-aggregation ou la formation de biofilms Parfois, un plasmide inséré est présent en si grand nombre de copies qu'il peut modifier la régulation chromosomique de certains gènes en volant tous les facteurs de transcription... Une piste, comme ça.  [...] En fait le plasmide ne comprend pas tout le canal chlore, il ne contient que le promoteur de CFTR, associé à une firefly luciferase. Par conséquent les bactéries ne synthétisent rien de mauvais en théorie.  [...]

[Biologie Moléculaire] Deux questions d'annales PCEM1

Pour cela, vous devez isoler une région spécifique du long transcrit que vous allez pouvoir insérer en anti sens dans un plasmide afin de produire votre ARN anti sens.  [...] Il vous faut l'insérer en sens inverse par rapport au promoteur, il vous faut donc un plasmide. promoteur-BamH1-Pst1. C'est le plasmide P1.  [...]

[Génétique] vecteur de plasmide

Je passe juste pour compléter ce qu'a dit caro56, si tu fais ça tu sélectionne bien les bactérie qui ont intégré le plasmide recombinant mais le problème c'est que dans ce plasmide tu ne sais pas si ton gène a été correctement intégré. Car en fait tu peux avoir des bactéries avec un plasmide recombinant sans ton insert.  [...] Dans ce cas pour différencier ces bactéries de celles qui ont le plasmide recombinant avec ton insert, on fait ce que l'on appelle le test blanc-bleu. Dans ton plasmide tu as un gène de résistance, un gène lacz avec son promoteur et d'autre partie encore.  [...]

[Biochimie] pBluescript II KS

Bonjour, j'aimerais savoir que signifie le KS à la fin de PBluescript II KS.   [...] Le plasmide KS a le site de restriction pour KpnI proche du promoteur LacZ alors que le plasmide SK a le site pour SacI proche du promoteur.  [...]