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Besoin d'aide urgent !

J'avais 2300 cellules/uL, mon prof me demande pour une plaque de 32 puits combien de cette solution de cellule je dois mettre sachant que dans 1 puis je dois mettre 1x10^5 Celllules pour 100uL.  [...] Besoin d'aide urgent n'est pas un titre, un titre permet au gens qui s'y connaissent de savoir que votre sujet peut les concerner.   [...]

[Biologie Cellulaire] Culture primaire de monocytes

Une partie des cellules ne différencie pas et reste collée au fond de la plaque 6 puits et la viabilité cellulaire chute considérablement (seulement 60 % de viabilité ). Pouvez-vous m'aider à trouver une solution à ce problème Merci d'avance.  [...] Il est normal que des cellules issues de sang périphérique meurent pour la plupart dans un milieu de culture. Cela aurait été plus inattendu si les cellules était issu d'une lignée déjà établie en culture. La population cellulaire devrait se stabiliser à un moment donné puis augmenter.  [...]

[Biologie Cellulaire] Test cytotoxicité MTS

qqun pourrait-il m'aiguiller je ne connais pas le nombre de cellule optimum que je dois ensemencer dans ma plaque 96 puits pour réaliser ce test, pour les cellules HT29 N je dois ensemencer a 5000 cellules par puits.  [...] Je suis sceptique quant à l'idée que vous obtiendrez une réponse précise. Je pense que la seule solution est de faire une gamme pour tester la quantité de cellules optimale.  [...]

[Biologie Cellulaire] Problème culture cellulaire HEK293 en plaque 96 puits

Je travaille actuellement avec des HEK293 que j'ai repiquées en plaque 96 puits dans le but de faire un MTS. 24h après le repiquage (~10000 cellules/puits), mes cellules apparaissent adhérentes, belles et bien éparpillées dans le puits mais peu confluentes (20% grand max).  [...] La seule solution potable que j'ai trouvé c'est d'incliner ma plaque 96p à l'opposé de moi (donc vers le fond de ma hotte) et de poser les tips inclinés le long de la paroi des puits (le haut de la pipette étant orienté vers le fond de la hotte). Et surtout de déposer ma solution très très très très doucement.  [...]

[Immunologie] ELISA coating et conservation

Je viens de lire. lavage par trempage. Ce qui voudrai dire que tu immerge ta plaque dans ta solution de tween Si c'est le cas, c'est pas super top comme méthode. Si tu n'as pas d'automate de lavage, tu peux toujours remplir tes puits avec ta solution, les vider en essayant de ne pas transférer de solution d'un puit à l'autre, puis de taper ta plaque contre du papier absorbant pour sécher les puits aux maximum.  [...] Ce que je fais, c'est qu'après incubation je vide les plaques fortement, je les claque contre le bord de l'évier, je les remplis de solution de Tween 20, je les laisse 5 minutes avec la solution dans les puits (c'est ce que j'appelle trempage ), et je les vide et claque contre du papier absorbant comme tu l'as dit. Je répète ça 3 fois.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plan de plaque, validation de méthode...

Alors voilà, j'ai une petite question à vous poser. Dans le cadre de la validation d'une méthode de PCR, je dois mettre en place des plans de plaque de 96 puits avec comme références, un solution de plasmide, une lignée cellulaire et des échantillons cliniques. Tous positif au gène en question.  [...] Dans la mesure où vous avez une solution de plasmides, ce n'est pas de la quantification relative que vous faites mais de la quantification absolue. Donc pas besoin de gène de house keeping.  [...]

[Biologie Moléculaire] petit calcul

J'ai une petite question toute bête de calcul. J'ai calculé la concentration d'antibiotique que je devais ajouter afin d'avoir 2ug/mL d'antibiotique dans 6 mL. J'aifais un Ci*Vi = Cf*Vf. Jusque là pas de souci. J'ai dispatché 100 ul de ma solution préparée dans une plaque 96 puits.  [...] Mon petit doute c'est normalement dans les 100 ul de solution dispatché ma concentration en antibiotique reste toujours à 2ug/mL et ceux pour n'importe quel volume prélevé dans la solution préparée non.  [...]

[Biochimie] Dilutions

On fait des cinétiques enzymatiques à 1,2,3,4 mins, puis on met 0,1ml de cette solution avec 0,2ml de KOH dans un puits d'une plaque de microtitration (donc on dilue 3 fois), ceci afin de lire la DO e.  [...] On fait quand même une dilution de plus par rapport à la solution mère, même si c'est juste pour mesurer via le spectro je pense, ca doit être pour cela que la prof m'a dit d'en tenir compte.  [...]

[Biologie Cellulaire] Calcul culture cellulaire

Bonjour je me suis mise récemment à la culture cellulaire ainsi qu'à la transfection et j'ai beaucoup de mal avec les dilutions. En gros j'utilise le compteur de cellules. Si par exemple il me donne une concentration de 1.480.000 cel/ml (sachant que le culot a été repris dans 10ml de milieu) comment devrais je effectuer la dilution sachant que pour la transfection j'ai besoin de 125.  [...] 000 cellules par puits ( pour un puits donné je dois mettre 1.5 ml de suspension cellulaire et j'utilise au total un plaque de 6 puits).  [...]

[Biotechnologie] méthode de Bradford

J'ai une toute petite question sur le principe de cette méthode. Lorsqu'on veut par exemple quantifier les protéines d'une solution à l'aide d'une gamme de sérumalbumine bovine prédéfinie. Où met on le Bradford est ce qu'il est sur toute la plaque de micotitration ou bien il doit être mélanger dans chaque puits avec le sérum albumine et notre solution à titrer.  [...] Le bradford est un réactif, il doit être ajouté dans chaque puits contenant une protéine à doser, que ce soit l'étalon (la BSA) ou la solution à concentration inconnue.  [...]