• Forum - Plaque, Puits, Cellules

[Biologie Cellulaire] co-culture les cellules vont-elles interagirent??

Sur une mono-couche de cellules stromales adhérente et à 80% confluente (dans une plaque 6 puits) nous aimerions co-cultiver pendant 3 jours, des cellules B immatures appelé cellules transitionnelles.  [...] Par contre j'avais pensé à centrifuger légèrement la plaque 6 puits pour faire tomber les cellules transitionnelles au fond et favoriser la rencontre avec les cellules stromales. Cependant j'ai peur qu'au début et à la fin de la centrifugation mon milieu ne s'échappe des puits...Qu'en pensez-vous.  [...]

[Biologie Cellulaire] Problème test MTT et différenciation

Mon protocole est le suivant. dans une plaque 96 puits incubé 24h pour les cellules HepG2 et 48h pour les cellules SK-N-BE(2) à l'avance (à une concentration de 60 000 cellules/puits), je retire le milieu complet (avec SVF) de mes puits puis je dépose le traitement (molécule diluée dans du milieu incomplet.  [...] Je réalise également une différenciation des cellules SK-N-BE(2). pour cela j'ensemence une plaque 48 puits à 40 000 cellules/puits dans du milieu complet avec 10% de SVF le jeudi, le vendredi je change le milieu complet + 10% SVF et j'ajoute 10 µM d'acide rétinoïque.  [...]

[Biologie Cellulaire] Calcul culture cellulaire

Bonjour je me suis mise récemment à la culture cellulaire ainsi qu'à la transfection et j'ai beaucoup de mal avec les dilutions. En gros j'utilise le compteur de cellules. Si par exemple il me donne une concentration de 1.480.000 cel/ml (sachant que le culot a été repris dans 10ml de milieu) comment devrais je effectuer la dilution sachant que pour la transfection j'ai besoin de 125.  [...] 000 cellules par puits ( pour un puits donné je dois mettre 1.5 ml de suspension cellulaire et j'utilise au total un plaque de 6 puits).  [...]

[Biologie Cellulaire] Nombre de cellules

Certains commerciaux proposent des microscopes avec des logiciels d'analyse pour remplir cette fonction. De mémoire, tu peux faire une coloration au Tryptan Blue (les cellules vivantes excluent le bleu) ou même pas de coloration du tout (dans ton cas, sur cellules fixées par exemple).  [...] J'avais essayé un modèle de Zeiss, qui comptait précisément les cellules (à part au niveau des bords en visible, où il avait tendance à faire des erreurs - mais cela a du évoluer depuis le temps).  [...]

Expérience en matrigel pour un test d'angiogenèse in vitro

Pour ce faire j'ai transfecté des cellules endothéliales aortiques humaines (lipofectamine) pendant 48h. Puits je les ai trypsinées et réparties en plaque 96 puits contenant chacun 50µl de matrigel (solidifié par incubation préalable 1h à 37°C), à raison de 50 000 cellules/puits pour 150µl de MCDB+sérum10%.  [...] Comme toute première tentative qui se respecte, ça ne s'est pas passé comme prévu... Au delà du fait que les cellules ne font que peu de tubules, j'ai l'impression qu'elles s'agglutinent beaucoup plus que sur les images que j'ai trouvé dans la littérature.  [...]

[Biologie Cellulaire] Problème culture cellulaire HEK293 en plaque 96 puits

Je travaille actuellement avec des HEK293 que j'ai repiquées en plaque 96 puits dans le but de faire un MTS. 24h après le repiquage (~10000 cellules/puits), mes cellules apparaissent adhérentes, belles et bien éparpillées dans le puits mais peu confluentes (20% grand max).  [...] On dirait que mes cellules se sont décrochées lors du changement de milieu pour s'agglomérer sur les bords... J'avoue que j'ai du mal à comprendre surtout que j'ai été assez délicat pour éviter de décrocher les cellules (tips au fond du puits, coincé sur le bord, et aspiration du milieu doucement à la pipette puis dépôt du nouveau milieu en plaçant le tip sur la face interne du puits).  [...]

[Biologie Moléculaire] Ratio 260/230

Les cellules sont disposées en plaque 6 puits (10 millions de cellules par puit) et exposées à un toxique.  [...] Pour avoir utilisé le kit Qiagen et le nanodrop, je peux seulement vous dire qu'à chaque que j'avais une concentration faible et un mauvais ratio 260/230, c'est que mon ARN était dégradé. Il est effectivement très rare d'avoir une contamination à 230 nm avec les kits qui sont plutôt bien mis au point.   [...]

[Biologie Cellulaire] Test cytotoxicité MTS

qqun pourrait-il m'aiguiller je ne connais pas le nombre de cellule optimum que je dois ensemencer dans ma plaque 96 puits pour réaliser ce test, pour les cellules HT29 N je dois ensemencer a 5000 cellules par puits.  [...] mais qu'en est-il pour les cellules HT29 SN38 et les HT29 G- vu qu'il sagit toujours de cellules colorectales cancéreuses mais dans des conditions différentes ( déplété en glucose, sensible et résistante au SN38) le nombre de cellule est identique.  [...]

[Biologie Cellulaire] Besoin d'aide pour savoir quel test statistique utiliser

Pour vous expliquer un peu ma manip' (je donnerais peut-être trop de détails mais pour que vous ayez un maximum d'infos), je travaille sur une lignée cellulaire (MCF-7), je fais un ensemencement aléatoire (dans une plaque 24 puits, le puit dans lequel j'ensemence mes cellules est choisi au hasard sur la plaque, jusqu'à ce que tous les puits soient utilisés (toujours le même nombre de cellules)).  [...] Quelques jours après je réalise des traitements (différentes doses d'une même molécule + contrôle négatif (solvant) + contrôle positif) en triplicat, que je renouvelle 3 jours après. 3 jours après le dernier traitement j'évalue l'effet des traitements sur la prolifération cellulaire (comptage des cellules).  [...]

[Biologie Cellulaire] répartition de cellules

Quand j'essais d'ensemencer des HEK 293 dans une plaque 6 puits, elles s'agglutinent toutes au centre de mon puit. Est-ce dû au nombre de cellules que je mets dans mes puits ou plutot à la façon dont je remue ma plaque pour les répartir... J'ai tout essayer mais elles ne veulent rien entendre.. Alors d'après vous que dois-je faire.  [...] Je n'utilise pas de HEK mais des COS et des P19. Les COS poussent un peu mieux que les HEK mais ça ne doit pas se jouer à grand chose. J'ensemence à 800 000 C/boite et surtout je mélange en faisant des 8 sous la hotte avec ma boite. Il faut faire ça doucement, prendre son temps (deux/trois minutes).   [...]